本文看点[视频]：对于肝功能衰竭及肝代谢紊乱疾病，采用组织工程技术构建可植入的工程化肝细胞移植物有望成为一种新的治疗途径。人们尝试采用生物可降解材料构建不同的工程化肝细胞移植物，并将其植入腹腔、皮下等多个肝外位点，显示出潜在的治疗效果。然而，在目前的肝组织工程研究中主要采用成熟的肝细胞，这种细胞虽然具有成熟的肝细胞功能，但存活及增殖能力有限。因此研究者们正在努力寻找新的细胞来源。新生动物肝细胞不仅有一定的肝细胞功能，而且具有分化增殖能力，正在受到人们的关注。[本文视频由张博峰教授提供]  
    课题背景：本课题受国家自然科学基金支持，主要研究肝脏细胞和不同材料之间的相互作用。重点是研究肝脏细胞和生物可降解支架复合构建可植入工程化肝组织。目前已经用液态生物支架如胶原和纤维蛋白胶构建了可注射的工程化肝组织，分别植入皮下、腹腔和肝脏原位，证实肝细胞能够存活并表达功能。
    应用要点：因为肝脏构造及功能极其复杂，工程化肝组织的构建在国内很少涉及。国外有部分学者进行了工程化肝组织的构建研究，但多使用聚乳酸、聚乳酸-乙醇酸共聚物等硬质材料。作者选用了液态生物材料，从而使得构建的工程化肝组织具有简便、高效的优点。而选用的种子细胞，因其成分、功能的多样性，也为进一步的细胞共移植研究提供了良好的模型。
    同行评价：实验采用新生大鼠肝细胞及胶原构建工程化肝组织，一旦在体内实验中获得成功，将为临床治疗肝衰竭等疾病提供新的思路。

作者简介：张博峰，男，1978年生，湖北省罗田县人，汉族，2001年解放军第三军医大学毕业，医师，主要从事肝组织工程的研究。

摘要

目的: 在供体肝短缺的情况下，构建可植入的工程化肝组织具有重要的临床意义。实验尝试以新生大鼠肝细胞为种子细胞体外构建工程化肝组织，以期进一步的体内植入。

方法：实验于2007-04/08在解放军总医院普通外科研究所完成。①实验材料：SPF级、出生24 h以内的雄性SD新生大鼠。②实验过程：采用胰酶消化法获取新生大鼠肝细胞；以2×L-DMEM液（添加地塞米松10 μg/L、表皮生长因子20 μg/L、肝细胞生长因子40 μg/L及胰岛素0.04 U/mL）与液态鼠尾胶原等比例混合；再将肝细胞与胶原凝胶复合构建细胞/凝胶复合物，接种于培养板进行培养。③实验评估：培养后第1，3，5，7，9天，采用相差显微镜观察、四甲基偶氮唑盐比色法、苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色分别对工程化组织的生长情况及组织形态特征进行观察，并对工程化组织的白蛋白合成功能及尿素的代谢水平进行评价。

结果：①肝细胞与胶原凝胶复合后，细胞均匀的分布在复合物中。在整个培养过程中，肝细胞保持着稳定的细胞形态。②四甲基偶氮唑盐检测显示肝细胞活性在生长初期平缓下降，直至第5天时仍然保持75%的细胞活性，之后快速下降。③体外培养5 d后，相差显微镜下观察显示肝细胞在胶原凝胶中呈三维立体生长，并保持肝细胞胞体圆形，核大而圆的特异形态；免疫组织化学证实这些肝细胞抗白蛋白抗体染色呈强阳性。④对培养上清中白蛋白和尿素的含量测定表明胶原凝胶中的肝细胞在培养初期保持着稳定的代谢合成功能。

结论：用新生大鼠肝细胞及胶原构建出一种有功能的工程化肝组织模型，这种模型可以应用于今后的工程化肝组织研究。

关键词：组织工程，胶原；凝胶类，大鼠，肝细胞

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