本文看点[视频]：组织工程作为一门新兴的边缘学科，为修复组织缺损这一难题提供了新的解决途径。种子细胞和支架材料是组织工程技术的基础。前脂肪细胞位于成熟的脂肪组织之中，能定向分化为脂肪细胞，具有很强的增殖能力，可在体外大量扩增，并能够于体外培养环境中诱导分化为成熟的脂肪细胞。[本文视频由兰海教授提供]  
    课题背景：课题获得国家自然科学基金资助，项目编号30270398；受教育部博士点基金资助，项目编号20020620084。研究目的是利用组织工程技术构建脂肪组织修复脂肪软组织缺损。前期已经对前脂肪细胞和骨髓基质干细胞作为种子细胞的机制进行了详细的分析。目前研究方向主要集中在支架材料的选择、种子细胞与支架材料复合培养，以及复合材料在体内的分化、降解和成脂能力。
    应用要点：常用的组织工程脂肪的支架材料包括胶原、透明质酸等，这些材料来源有限，且制作成本高，其生物相容性还有待验证。实验以小肠黏膜下层作为支架材料，属于天然的生物衍生材料，具有来源广泛、制作简单、费用低廉等优点，有利于大规模的生产应用。
    偏倚或不足：①课题在体外验证了前脂肪细胞与小肠黏膜下层的复合，但只是检测了复合的细胞数，没有开展相关实验来证实细胞的活性、增殖和成脂能力。②课题所用的小肠黏膜下层来源生猪，未作细菌学和免疫学相关指标检测，进一步的体内应用将受到限制。③在体外培养基条件下，细胞与支架材料可以很好的黏附，但在体内生物环境中复合材料的降解和转归还待深入分析。

作者简介：兰海☆，男，1975年生，四川省成都市人，汉族，四川大学华西医院骨科在读博士，主治医师，主要从事创伤修复与功能重建方面的研究。

摘要

背景：细胞与支架的成功复合是组织工程重要的技术环节，小肠黏膜下层作为一种生物衍生材料具有良好的细胞相容性，同时促血管化能力较强。

目的：观察前脂肪细胞与小肠黏膜下层的体外复合情况及其黏附状态。

设计、时间及地点：2004-07/2005-07在四川大学华西医院组织工程实验室完成的随机对照细胞观察。

材料：前脂肪细胞来源于腰椎创伤前路手术的成年女性腹部皮下脂肪组织。小肠黏膜下层来源于新鲜猪大肠，为白色半透明膜，由四川大学华西医院组织工程实验室制备。

方法：将脂肪组织剪碎成颗粒状，采用酶消化法获得原代前脂肪细胞，传代后加入含有地塞米松、胰岛素、IBMX、吲哚美辛的诱导培养基进行扩增。将小肠黏膜下层预湿，分3种方式，即分别用磷酸盐缓冲液、10%胎牛血清、10%胎牛血清+DMEM浸泡。取第3代前脂肪细胞制备细胞悬液，分两种方法接种在小肠黏膜下层：浸渍法是直接向置有小肠黏膜下层的孔内加入1 mL细胞悬液；沉淀法是向每个小肠黏膜下层的表面均匀滴入按所需接种密度高浓缩的细胞悬液20μL。

主要观察指标：MTT法检测小肠黏膜下层经不同预湿和接种方法对黏附细胞数的影响。苏木精-伊红染色和电镜观察前脂肪细胞在小肠黏膜下层的黏附状态。

结果：相同接种方法下，经3种方式预湿的小肠黏膜下层细胞吸光度值基本相似(P > 0.05)。相同预湿方式下，沉淀法接种细胞黏附率显著高于浸渍法（P < 0.05）。采用沉淀法接种复合，接种密度为（2.5~7.5）×104/cm2时黏附细胞数逐渐增多，呈正性相关（r = 0.93，P < 0.05），升高至1×105/cm2后黏附细胞数不再增加。接种24 h后，前脂肪细胞能够在小肠黏膜下层表面生长，并有突起长出。

结论：①小肠黏膜下层给予不同的预湿方式对前脂肪细胞黏附状态无影响，但沉淀法接种复合效果优于浸渍法。②1×105/cm2为前脂肪细胞最佳接种密度，其在小肠黏膜下层上具有良好的黏附性。

关键词：前脂肪细胞；小肠黏膜下层；组织工程；细胞分化；细胞增殖

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