本文看点[视频]：睑板腺的正常分泌和排泄功能受神经、激素等因素的影响，任何一种因素引起睑板腺分泌量减少或分泌物的质发生了改变或排泄脂质的管道受阻将导致睑板腺功能障碍，最终导致脂质缺乏性干眼症的发生。[本文视频由李联祥教授提供]  
    课题背景：本文章是河北省教育厅资助课题“人眼睑板腺和Zeis腺性激素定性定位的免疫组织化学研究”的部分内容。近年来，国内外学者先后发现在人、大鼠的睑板腺腺泡上皮存在着雌激素受体，认为雌激素及其受体的活动在睑板腺脂质合成和分泌方面扮演着重要角色，本课题旨在观察雌激素水平降低状态下睑板腺的功能状态。
    应用要点：实验构建的模拟人工绝经期模型，利用裂隙灯显微镜钴蓝光扫描照射方法和组织化学方法分别检测了活体泪膜破裂时间和睑板腺组织切片脂质量的变化，结果证明雌激素水平降低可导致睑板腺功能障碍，腺泡上皮细胞脂质量减少。同时提出利用组织化学方法检测、衡量和评价睑板腺腺泡上皮细胞脂质量是一种新的、可行的方法，值得推广应用。
    相关连接：睑板腺的功能是分泌睑脂，当发生睑板腺功能障碍时,由于正常的睑脂分泌功能遭到破坏，脂质成分发生改变，可出现一系列眼表不适等临床症状。多数研究认为，睑板腺功能障碍与激素调节有关。

作者简介：王璐☆，女，1974年生，重庆市人，汉族，重庆医科大学在读博士，讲师，主要从事干细胞生物学研究。

摘要
目的：应用原始生殖细胞进行全能干细胞的研究具有与胚胎干细胞同样广阔的前景，尤其适合于难以从囊胚内细胞团中分离培养胚胎干细胞的动物。但胚胎生殖细胞体外培养条件一直是制约这方面发展的瓶颈。实验设计了体外有效扩增小鼠原始生殖细胞的方法，拟搭建稳定高效的原始生殖细胞培养平台。

方法：实验于2006-10/2007-08在重庆医科大学组织胚胎学教研室重庆市生物化学分子药理学重点实验室完成。①实验材料：清洁级昆明孕鼠由重庆医科大学动物实验中心提供，见阴栓计为0.5 d胚龄,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取胚龄8.5 d胎鼠尾端尿囊及周围组织, 取胚龄9.5~10.5 d胎鼠后肠及周围组织，取胚龄11.5 d，12.5 d胎鼠生殖嵴及周围组织，分别经0.25%胰酶-0.02%EDTA消化并接种于0.1%明胶包被的培养皿中。比较不同妊娠时间点取材对原代、F1代胚胎生殖细胞克隆形成的影响。采用SSEA-1免疫组织化学法计数细胞阳性率，计数胚胎生殖细胞克隆联合MTT法比较胚龄11.5 d，12.5 d两个时间点原始生殖细胞的增殖能力。比较上述两种取材培养方法对胚龄11.5 d，12.5 d原始生殖细胞扩增的影响。采用碱性磷酸酶染色、免疫组化检测SSEA-1、免疫荧光检测Nanog，体外分化实验鉴定分化能力。

结果：①胚龄11.5 d，12.5 d胎鼠原代和F1代集落形成率较胚龄8.5~10.5 d高，扩增效率显著提高(P < 0.01)。②免疫组织化学法检测分离的胚龄11.5 d，12.5 d原始生殖细胞 SSEA-1阳性率差异不显著 (P > 0.05)。原代第3天克隆计数显示，胚龄11.5 d胎鼠高于12.5胚龄胎鼠 (P < 0.01)，MTT数据显示11.5胚龄组稍高于12.5胚龄组。③两种方法对胚龄11.5 d，12.5 d胎鼠胚胎生殖细胞集落形成无显著性差异(P > 0.05)，但生长方式有所不同。④克隆胚胎生殖细胞呈典型的胚胎干细胞样集落生长，能稳定传代；碱性磷酸酶、SSEA-1、Nanog表达强阳性；体外能分化为囊状类胚体。

结论：胚龄11.5 d和12.5 d胎鼠，尤其是胚龄11.5 d胎鼠扩增原始生殖细胞效率较高，在这两个时间点运用与周围组织共培养法和生殖嵴分离培养法均适宜。

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