本文看点[视频]：研究表明肝内至少存在着三种干细胞：真正的功能性干细胞、潜能干细胞、定向干细胞。卵圆细胞是最早发现于啮齿类动物肝脏的干细胞，起源于Hering管附近，肝毒性药物刺激大鼠肝脏的动物实验中可见大量卵圆细胞增殖和分化为肝实质细胞。[本文视频由缴富斌教授提供]  

    创新要点: ①实验选定肝脏卵圆细胞作为诱导分化的对象，是国内较新的选题，符合国际研究趋势。②采用改良的梯度离心方法，有效的分离大鼠肝卵圆细胞，分离的细胞具有干细胞的特点。③采用的高浓度葡萄糖作诱导剂诱导培养卵圆细胞在国内也是较新的方式。

    偏倚或不足：实验尚处于初级阶段，整个实验模型需要进一步优化，以提高干细胞诱导分化效率，产生足够的种子细胞供临床应用；对于诱导卵圆细胞向胰岛素分泌细胞方向分化的分子机制需要进一步观察。

    相关链接：近年来，干细胞定向诱导分化为胰岛素分泌细胞已成为研究热点。肝脏卵圆细胞与胰岛细胞有着相同的胚胎组织来源，在细胞自身遗传的基因程序性表达上与胰岛干细胞接近，有着广泛的应用前景。 此项研究起步较晚，因此在如何选择适宜的体外培养条件如何获得更高纯度的胰岛素分泌细胞、诱导产生多量的胰岛素分泌细胞、如何提高干细胞诱导分化效率等都需进一步实验。

作者简介：缴富斌★,男，1976年生，天津市静海县人，汉族，解放军总医院在读硕士，主治医师，主要从事老年心脑血管疾病防治研究。

摘要
背景：原代分离的肝卵圆细胞具有双向分化的能力和横向分化的可塑性。
目的：分离大鼠肝脏卵圆细胞，在化学诱导剂作用下使其定向分化为胰岛素分泌细胞。
设计、时间及地点：对照观察细胞实验，于2007-05/2008-01在解放军总医院基础研究部，国家重点实验室完
成。
材料：SPF级 SD大鼠，体质量(120±20) g。
方法： 采用改良梯度离心法分离、培养大鼠肝卵圆细胞，并行免疫组织化学鉴定。随后将卵圆细胞置于含有诱导剂Nicotimide和高浓度葡萄糖的RPMI 1640培养液继续培养，同时以不含诱导剂的RPMI 1640培养液培养的卵圆细胞作为阴性对照。
主要观察指标：采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联免疫吸附实验、放射免疫分析检测两组卵圆细胞胰岛素的表达。
结果：改良的梯度离心方法分离的细胞具干细胞特点，可形成集落，并且OV6、CD34、Nestin染色呈阳性。分离的大鼠肝卵圆细胞，加入诱导剂Nicotimide和高浓度葡萄糖诱导培养1周后，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、酶联免疫吸附、RIA检测均显示胰岛素分泌量远高于不含诱导剂细胞（P < 0.05）。
结论：化学诱导剂Nicotimide和高浓度葡萄糖可以在短时期内作用肝卵圆细胞可启动胰十二指肠同源盒基因-l基因，使之定向分化为胰岛素分泌细胞。
关键词：肝脏干细胞；卵圆细胞；PDX-1；梯度离心；RIA

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