人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性-中国组织工程与临床康复2007年1期目次

人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性***☆

田宇1，鲁红1，倪龙兴1，肖明振1，余擎1，蒲勤2，路凡2

Preparation of human ameloblastin antibody and the
tissue expression specificity***☆

Abstract

AIM：To prepare anti-human ameloblastin antibody, by which to study the tissue specificity of human ameloblastin.

METHODS：The experiment was performed in the Basic Department of Biochemistry and Molecular Biology of Fourth Military Medical University in March 2002. The C telopeptide of recombinant purified ameloblastin was used as the antigen to mixed with complete/incomplete Freund’s adjuvant. The blood sample was obtained from the carotid artery (CA) of immune New Zealand white rabbits after 5 times of immunity, and the serum was separated purified with saturated ammonium sulphate to establish rabbit-anti-human ameloblastin multiclonal antibody. The titer of antibody was detected by double immunodissfusion test and ELISA. The tissue expression specificity of human ameloblastin antibody was determined by Western Blot.

RESULT① ELISA detection showed that the titer of the rabbit-anti-human ameloblastin multiclonal antibody was about 1∶10 000. ② Western Blot indicated that the ameloblastin was specifically expressed in the tooth germ with a relative molecular mass of 65 000, but no expression-strap was found in the brain, heart, liver, spleen, lung, kidney, pancreas, thymus or skeletal muscle of human.

CONCLUSION: The anti-human ameloblastin antibody is successfully prepared, which provide a basis for the research on the tissue expression of ameloblastin in the tooth germ as well as the purification of protein by the antibody, and it is proved from the aspect of protein that the ameloblastin is the specific protein of tooth tissue, moreover, the relative molecular mass of ameloblastin in human tooth germ was about 65 000.

1College of Stomatology, 2Basic Department of Biochemistry and Molecular Biology, Fourth Military Medical University of Chinese PLA, Xi’an 710032, Shaanxi Province, China

Tian Yu☆, Doctor, Lecturer, Attending physician, College of Stomatology, Fourth Military Medical University of Chinese PLA, Xi’an 710032, Shaanxi Province, China
tianyu@fmmu.edu.cn

Supported by: the National Natural Sciences Foundation of China, No. 30300386*; Key Project of the Tenth Five-year Plan of the Army, No. 012089*; Academic Foundation for Young Scientists Granted by the Fourth Military Medical University*

Received: 2006-06-13
Accepted: 2006-08-28

摘要
目的：制备抗人成釉蛋白抗体，观察成釉蛋白在各组织中的表达。
方法：实验于2002－03在解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室完成。以重组、纯化的成釉蛋白C端肽为抗原，混入完全/不完全弗氏佐剂，免疫新西兰大白兔，经5次免疫后，颈动脉取血，分离血清并用饱和硫酸铵纯化，制备兔抗人成釉蛋白多克隆抗体，用双向免疫扩散试验和ELISA检测抗体的效
价。用Western Blot检测人成釉蛋白的组织表达特异性。
结果： ①ELISA检测结果：表明兔抗人成釉蛋白多克隆抗体效价达到1∶10 000。②Western Blot显示：成釉蛋白在人牙胚组织总蛋白中有特异性表达，相对分子质量约为65 000，在脑、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、胸腺、骨骼肌等组织中未见表达条带。
结论：制备了抗人成釉蛋白抗体，为研究成釉蛋白在人牙胚中的组织表达以及利用抗体纯化蛋白提供了基础，从蛋白水平证实成釉蛋白为牙胚组织特异性蛋白，并证实人牙胚组织中的成釉蛋白相对分子质量约为65 000。
关键词：人；印迹法，蛋白质；牙胚；牙釉质蛋白质类；抗体

田宇，鲁红，倪龙兴，肖明振，余擎，蒲勤，路凡．人成釉蛋白抗体的制备及组织表达特异性[J].中国组织工程研究与临床康复，2006，11(1):18-20
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/07-1/1k-18(ps).pdf]

解放军第四军医大学，1口腔医学院，2基础部生物化学与分子生物学教研室，陕西省西安市 710032

田宇☆，男，1974年生，黑龙江省哈尔滨市人，汉族，2002年解放军第四军医大学毕业，博士，讲师，主治医师，主要从事口腔牙体牙髓病学的研究。
tianyu@fmmu.edu.cn

国家自然科学基金资助（30300386）*；全军“十五”计划基金重点课题（012089）*第四军医大学学术新人资助基金资助*

中图分类号:R34
文献标识码:B
文章编号:1673-8225
(2007)01-00011-03

收稿日期：2006-06-13
修回日期：2006-08-28
（05-50-9-7645/W·X）

课题背景：釉基质蛋白在牙釉质的发育成熟过程中，不仅构成牙釉质形态、结构的支架，而且在牙釉质的生物矿化过程中发挥重要的调控作用，牙齿生物矿化机制的揭示对牙齿硬组织疾病的发病机制和治疗修复具有重要的指导意义，因此，釉基质蛋白一直是口腔科学研究的热门领域之一。成釉蛋白是从发育釉质的基质中分离得到的釉基质特异蛋白，对其研究刚刚起步，成釉蛋白的结构、功能以及生物代谢等仍不清
楚。

创新要点：课题采用反转录－聚合酶链反应技术，从人牙胚组织中克隆成釉蛋白基因，在大肠杆菌中进行表达，制备抗人成釉蛋白抗体，并观察了成釉蛋白的组织表达特异性。所得结果及制备的抗体为研究人牙胚中成釉蛋白的表达特点，研究成釉蛋白合成后的修饰加工和成釉蛋白的结构等作了准备，为今后进一步研究成釉蛋白结构和功能的关系奠定基础。

同行评价：研究成釉蛋白的生物学功能是目前热点课题，众多学者均致力于研究成釉蛋白在人牙胚组织中的表达特点。本实验用纯化的人成釉蛋白Ｃ端肽免疫新西兰大白兔，制备抗体并对抗体进行了鉴定。实验从蛋白水平上证实人成釉蛋白为牙胚组织特有，为研究成釉蛋白在人牙胚中的组织表达以及利用抗体纯化蛋白提供了基础。具有一定的实际意义和学术水平。