解放军白求恩军医学院附属第二六○ 医院五官科，河北省石家庄市 050081

张林祺★，男，1975年生，吉林省吉林市人，汉族，2006年解放军第四军医大学口腔医学院毕业，硕士，讲师，主要从事口腔修复学的研究。
zlq7772002@126.com

中图分类号:R318
文献标识码:A
文章编号:1673-8225
(2007)22-04318-03

收稿日期：2007-01-04
修回日期：2007-04-03
(07-50-1-42/Y·A）

Pharmacokinetics of ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets in healthy volunteers

Ａｂｓｔｒａｃｔ

ＡＩＭ： To develop a rapid and sensitive high performance liquid chromatography-mass spectrometry-mass spectrometry (HPLC-MS/MS) method and observe pharmacokinetics characteristics of ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets in healthy volunteers.
ＭＥＴＨＯＤＳ: Totally 18 male healthy volunteers were enrolled in March 2006. Experimental scheme was approved by the Ethics Committee of Guangzhou Liwan Maternal & Child Hospital before trial. The volunteers signed the informed consent, and then received a single oral dose of 3 orally disintegrating tablets containing 90 mg ambroxol hydrochloride. Blood samples were collected before administration and at minutes 15, 30 and 45 and at 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14 and 24 hours after administration, respectively. Experimental evaluation: ①Concentration of ambroxol in plasma was measured by HPLC-MS/MS method. Concentration-time curve was drawn. ②Experimental data were statistically analyzed and pharmacokinetics parameters were calculated by PKS program. ③Disintegration time and adverse reaction were observed.
ＲＥＳＵＬＴＳ: ①Concentration-time curve: Concentration-time curve was fitted with a two-compartment model after receiving a single oral dose of 3 orally disintegrating tablets containing 90 mg ambroxol hydrochloride. ②Pharmacokinetics parameters: Maximum concentration (Cmax), maximum time (Tmax), Elimination half-time (T1/2), 0－24 h area under the concentration-time curve (AUC0－24) and 0－∞ h area under the concentration-time curve (AUC0－∞?雪 were （171.87±53.92）μg/L，（1.3±0.3） hours ，（6.9±2.7） hours ，（730.6±243.8） μg/（L·h），（819.4±271.6）μg/（L·h）, respectively. ③Disintegration time and adverse reaction: The 18 healthy volunteers showed good chief complaint mouthfeel, no gravel feeling, with the disintegration time of 10－40 s, mean （21±11） s. No adverse reaction was found during the trial. Heart, liver and renal function was normal after the trial.
ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ: The analytical method appears to be sensitive, quick and accurate. The pharmacokinetic characteristics of a single dose of ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets in healthy persons are similar to that reported in literatures.

Huang YQ, Wen YG.Pharmacokinetics of ambroxol hydrochloride orally disintegrating tablets in healthy volunteers.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2007;11(22):4321-4324(China) [www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/07-22/22k-4321(ps).pdf]

摘要
目的：建立快速、灵敏的氨溴索人体内血药浓度的高效液相色谱－串联质谱测定法，观察盐酸氨溴索口腔崩解片在健康人体内的药物动力学过程。
方法：于2006－03选择男性健康志愿者18名，试验前实验方案经医院伦理委员会审批，志愿者签署知情同意书后，单剂量口服盐酸氨溴索口腔崩解片3片（含盐酸氨溴索90 mg）后，分别于给药前和给药后15，30，45 min，1，1.5，2，2.5，3，4，6，8，10，12，14，24 h采集血样。实验评估：①用高效液相色谱-串联质谱测定法测定血浆中氨溴索的浓度，绘制药-时曲线。②采用PKS程序对试验数据进行统计学分析处理，计算有关药物动力学参数。③观察药物崩解时限和不良反应情况。
结果：①药－时曲线：单剂量口服盐酸氨臭索口腔崩解片（含盐酸氨溴索90 mg）后，其药－时曲线拟合符合二室模型。②药物动力学参数：达峰浓度，达峰时间，清除半衰期，0～24 h、0～∞ h血浆药－时曲线下面积分别为（171.87±53.92）μg/L，（1.3±0.3）h，（6.9±2.7）h，（730.6±243.8）μg/（L·h），（819.4±271.6）μg/（L·h）。③药物崩解时限和不良反应：18名健康志愿者中口含受试制剂后主诉口感良好，无沙砾感，崩解时限为10～40 s，平均（21±11）s。在试验的过程中，未见不良反应，试验结束后复查心肝肾功能均正常。
结论：试验建立的氨溴索人体内血药浓度测定方法灵敏、快速、可靠；盐酸氨溴索口腔崩解片单剂量给药后在健康人体内药物动力学与文献报道基本一致。
关键词：盐酸氨溴索；口腔崩解片；药物动力学；高效液相色谱－串联质谱法；生物材料

黄友旗，温预关.盐酸氨溴索口腔崩解片在健康人体的药物动力学[J].中国组织工程研究与临床康复，2007，11(22):4321-4324
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/07-22/22k-4321(ps).pdf]

0 引言

盐酸氨溴索为溴已新在人体内的代谢产物，是一种黏液溶解剂，其能增加呼吸道黏膜浆液腺的分泌，减少黏液腺分泌，断裂痰液中的黏多糖纤维，使痰液黏度降低，从而使痰液变薄，易于咳出[1－9]。本药还可激活肺泡上皮Ⅱ型细胞合成表面活性物质，降低黏液的附着力，以利痰液排出，达到廓清呼吸道黏膜的作用，直接保护肺功能[10－15]。另外，本药还有一定的止咳作用。有关血浆中氨溴索的测定方法文献报道有高效液相法[1－3]，本文参照文献[4]采用高效液相色谱联用质谱法测定服药后血浆中氨溴索的浓度，分析18名健康志愿者口服盐酸氨溴索口腔崩解片后的药动学参数。

1 材料和方法

设计：重复测量设计。
单位：广州市荔湾区妇幼保健院保健科。
材料：于2006-03选择男性健康志愿者18名，年龄21～26岁，平均（25.2±2.3）岁，身高167～178 cm，平均（173.5±3.8）cm，体质量59～67 kg，平均（62.8±2.8）kg。试验前实验方案经医院伦理委员会审批，志愿者本人签署知情同意书后，进行体格检查，胸透、心电图、血压、血尿常规及肝肾功能等各项指标均正常。受试者无吸烟、饮酒史，受试前1个月内未参加过其他药物试验，2周内没有服用任何药物。药品与试剂：盐酸氨溴索口腔崩解片（哈尔滨儿童制药厂，30 mg/片，批号：060101）。盐酸氨溴索标准品（哈尔滨儿童制药厂，批号：20050901，含量≥99.87%）； 内标物：地西泮对照品（批号：050812，含量≥99.5%，广东三才制药集团公司）；乙腈（色谱纯，默克公司）；重蒸水；乙酸乙酯、二氯甲烷、乙酸铵、乙酸（广州市化学试剂厂）均为分析纯。仪器：LC-VP高效液相色谱仪系统（LC-10Atvp二元泵、SIL-10Advp自动进样器、CTO-10Acvp可调柱温箱、CTO-10Avp数据处理、CLASS-VP工作站，日本岛津）；数据处理机C-R7A/C-R8A（美国应用生物系统公司）；API3000LC/MS/MS（美国API公司）；XW-80A旋涡混合器（原上海医科大学仪器厂）；SARTORIUS电子天平（瑞士）；MICRO12-24高速离心机（美国）；MMM-GROUP真空干燥箱（德国）。
设计、实施、评估者：设计为第一作者，实施为全部作者，评估为第二作者，评估者经过正规培训。
方法：
给药方法、血样采集与不良反应监护：受试者服药前禁食至少10 h，然后口服受试制剂3片（含盐酸氨溴索90 mg），受试制剂口含后，记录崩解时限和口感，服药2 h后方可自由进水，服药4 h后统一食用低蛋白、低脂肪标准餐。每例受试者均于用药前在前臂静脉安置留置针抽血，服药前0 h和服药后15，30，45 min，1，1.5，2，2.5，3，4，6，8，10，12，14，24 h取静脉血5 mL/次于肝素抗凝的试管中，3 000 r/min，离心10 min，取血浆贮于－20 ℃冰箱中备测。
受试者在试验前1 d和试验期间，禁用酒类或咖啡类饮料，试验期间在休息室内活动，不长时间卧床或进行剧烈运动。整个试验过程均在医师和护士监护下进行，并于给药后不同时间监测受试者的反应，及时处理和记录试验过程中发生的不良反应。
HPLC-MS/MS血药浓度检测方法：
色谱条件：色谱柱：DiamonsilTMC18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：v（乙腈）∶v（乙酸铵）(0.005 mol/L，用乙酸调至pH 4.5)=98∶2；柱温：40 ℃；进样体积：4 μL；流速：1.5 mL/min。质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描，氨溴索m/z378.8 →263.9，地西泮m/z285.9→194.1；检测方式：多反应检测；电喷雾电压：5 500 V，雾化气压力：0.076 MPa，气帘气压力：0.069 MPa；辅助气流速：6 L/min；离子源温度：350 ℃。
样品的处理与测定：精确吸取含药血浆0.5 mL置10 mL带塞磨口玻璃锥形离心管中，加入500 μg/L地西泮乙腈溶液50 μL快速振荡3 s。加入0.1 mol/L氢氧化钠溶液0.2 mL，振荡10 s，再加v（乙酸乙酯）∶v（二氯甲烷）= 4∶1混合溶液3 mL，密塞，旋涡振荡2 min， 3 500 r/min，离心5 min，吸取有机层放入3 mL带塞磨口玻璃锥形离心管内，37 ℃真空干燥至干。进样前加入v（乙腈）∶v（水）=9∶1溶液200 μL溶解，快速振荡10 s使残渣溶解，3 000 r/min，离心5 min，吸取上清液4 μL进样。
方法专属性：分别取6名受试者服药前空白血浆0.5 mL置10 mL试管中，除不加内标物外，按色谱条件依法操作，进样4 μL，获得空白血浆样品的色谱图（图1a）；将一定浓度的标准溶液和内标溶液加入空白血浆中，依同法操作获得相应的色谱图（图1b），氨溴索、地西泮的出峰时间分别约为1.65 min和1.54 min；取健康受试者给药后收集的血浆样品，依同法操作，得色谱图（图1c）。结果表明，空白血浆中内源性物质不干扰氨溴索及内标物地西泮的测定。
标准曲线制备和定量下限：取空白血浆0.5 mL，分别加入0，50，100，250，500，1 000，2 000，3 000 μg/L氨溴索对照品溶液50 μL，振荡3 s，使血浆药浓相当于0，5，10，25，50，100，200，300 μg/L，然后按上述“样品的处理与测定”项处理。经高效液相色谱－串联质谱测定法分析，以氨溴索峰面积与内标峰面积之比（F）作横坐标，以血浆中氨溴索浓度(c)为纵坐标，得到血浆中氨溴索浓度标准曲线。结果表明，在5～300 μg/L血浆中氨溴索的标准曲线线性良好，回归方程及相关系数分别为：c =19.26F+1.17，r =0.999（n =7）。

本法定量下限浓度为5 μg/L，平行对6个浓度为5 μg/L的含药血浆样品处理后进行色谱分析，其方法平均回收率为114.21%，相对标准偏差4.11%，小于5%。最低检测浓度为1 μg/L(S/N=10)。
准确度及精密度试验：按“标准曲线制备”方法分别配制低（12.5 μg/L）、中（125 μg/L）、高浓度（250 μg/L）的氨溴索血浆溶液各15份，均分3批，每批5份，并于每批的标准曲线同时进行，依上述“样品处理方法”项处理后取4 μL进样测定，求得本法的准确度和精密度，结果批内、批间相对标准偏差均小于15%，方法回收率分别为103.38%，101.04%，98.08%。
提取回收率：另取上述低、中、高浓度氨溴索血浆溶液各5份，依上述“样品处理方法”项处理后取4 μL进样。同时，以空白血浆除不加标准系列溶液和内标外，按上述“样品处理方法”项处理后向上层有机相中加入相应浓度的氨溴索和地西泮溶液，37 ℃真空干燥至干，再加入v（乙腈）∶v（水）=9∶1溶液200 μL溶解，快速振荡10 s使残渣溶解，3 000 r/min，离心5 min，吸取上清液4 μL进样。以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率，低、中、高3个浓度的提取回收率分别为51.84%，50.80%，58.00%，内标地西泮的提取回收率为69.95%。
稳定性试验：取上述低、中、高浓度氨溴索血浆溶液的质控样品，每个浓度9个样品分析，分为3组，每组每个浓度3个样品。考察样品分别经室温放置48 h、－20 ℃冻存14 d、冻融3次的稳定性。低、中、高浓度样品在室温放置48 h 相对标准偏差分别为3.66%，4.91%和8.24%，冻存14 d 相对标准偏差分别为3.52%，10.64%和4.21%，冻融3次相对标准偏差分别为1.84%，6.35%和4.28%。
质量控制：取上述低、中、高浓度氨溴索血浆溶液样品置－20 ℃冰箱冻存备用，此即为质控样品。检测每批血浆样品前须做随行标准曲线，并同时检测质控样品低、中、高浓度。结果随行标准曲线线性良好，低、中、高浓度质控样品的偏差均在15%内，符合体内药物分析要求，本试验血浆样品的测定结果准确、可靠。
主要观察指标：健康志愿者单剂量口服盐酸氨溴索口腔崩解片（含盐酸氨溴索90 mg）后的平均药－时曲线和主要药动学参数，药物崩解时限和不良反应情况。
统计学分析：将18名受试者单剂量口服受试制剂3片（含盐酸氨溴索90 mg）后的血药浓度列表并计算x ±s，绘制药－时曲线；用上海宏能软件有限公司编写的PKS程序对药－时数据进行拟合，求算有关药动学参数。

2 结果

2.1 健康志愿者单剂量口服盐酸氨溴索口腔崩解片（含盐酸氨溴索90 mg）后的平均药－时曲线 见图2。

2.2 健康志愿者口服盐酸氨溴索口腔崩解片（含盐酸氨溴索90 mg）后的主要药动学参数 见表1。

2.3 崩解时限和不良反应情况 18名健康志愿者中口含受试制剂后主诉口感良好，没有沙砾感，崩解时限为10～40 s，平均（21±11）s。在试验的过程中，未见不良反应，试验结束后复查心肝肾功能均正常。

3 讨论

人血浆中氨溴索浓度检测方法国内有用RP-HPLC法。本文采用高效液相色谱－串联质谱法，所用血浆仅为0.5 mL，且进样量仅为4 μL便达到实验要求，检测一个标本仅需2 min，该方法具有杂质干扰少，灵敏度高，快速检测的优点，检测限与国外文献报道相似[4]。
口腔崩解片是一种在口腔内不需水即能崩解或溶解的片剂，具备如下性质：①无需水的送服，可在口腔中迅速崩解。②具有较大的载药量。③口感好。④片剂在口中崩解后，无沙砾感。⑤药物在口腔中的残留量少。⑥剂型对湿热不敏感。⑦制备、包装过程简单，造价低廉[16]。目前被列为国家五类新药。非常适用于儿童、老人和吞咽有困难的患者[17－20]，具有广阔的市场发展空间。目前国内关于该药口腔崩解片的药代动力学未见有文献报道[21，22]，本实验药代动力学参数结果与国外文献[2]报道基本一致。

4 参考文献

Koundourellis JE, Malliou ET, Broussali TA. High performance liquid chromatographic determination of ambroxol in the presence of different preservatives in pharmaceutical formulations.J Pharm Biomed Anal 2000;23(2-3):469-475
Lee HJ, Joung SK, Kim YG, et al. Bioequivalence assessment of ambroxol tablet after a single oral dose administration to healthy male volunteers.Pharmacol Res 2004;49(1):93-98
王唯红，邓树海，黄桂华，等. RP-HPLC法测定人血浆中盐酸氨溴索片的浓度及其药代动力学[J].药物分析杂志，2001，21(1):23-25
Kim H, Yoo JY, Han SB, et al. Determination of ambroxol in human plasma using LC-MS/MS.J Pharm Biomed Anal 2003;32(2):209-216
Satinsky D, Huclova J, Ferreira RL, et al. Determination of ambroxol hydrochloride, methylparaben and benzoic acid in pharmaceutical preparations based on sequential injection technique coupled with monolithic column.J Pharm Biomed Anal 2006;40(2):287-293
Santos JL, Clausse A, Lima JL,et al. Determination of ambroxol in an automated multi-pumping pulsed flow system.Anal Sci 2005;21(4):461-464
Seifart C, Clostermann U, Seifart U,et al. Cell-specific modulation of surfactant proteins by ambroxol treatment.Toxicol Appl Pharmacol 2005;203(1):27-35
Guo Y, Sun XM. Clinical observation on Biyan Qingdu Granule and ambroxol hydrochloride in treating secretory otitis media.Zhongxiyi Jiehe Xuebao 2004;2(4):277
Qi M, Wang P, Cong R,et al. Simultaneous determination of roxithromycin and ambroxol hydrochloride in a newtablet formulation by liquid chromatography.J Pharm Biomed Anal 2004;35(5):1287-1291
Kubo W, Miyazaki S, Dairaku M,et al. Oral sustained delivery of ambroxol from in situ-gelling pectin ormulations.Int J Pharm 2004;271(1-2):233-240
Lee HJ, Joung SK, Kim YG,et al. Bioequivalence assessment of ambroxol tablet after a single oral dose administration to healthy male volunteers.Pharmacol Res 2004;49(1):93-98
Villacampa J, Alcantar F, Rodriguez JM,et al. Pharmacokinetic properties of single-dose loratadine and ambroxol alone and combined in tablet formulations in healthy men.Clin Ther 2003;25(8):2225-2232
Abdel-Ghani NT, Hussein SH. Determination of ambroxol hydrochloride in pure solutions and some of its pharmaceutical preparations under batch and FIA conditions.Farmaco 2003;58(8):581-589
Ishiura Y, Fujimura M, Yamamori C,et al. Effect of carbocysteine on cough reflex to capsaicin in asthmatic patients.Br J Clin Pharmacol 2003;55(6):504-510
Fischer J, Pschorn U, Vix JM,et al. Efficacy and tolerability of ambroxol hydrochloride lozenges in sore throat.Randomised, double-blind, placebo-controlled trials regarding the local anaesthetic properties.Arzneimittelforschung 2002;52(4):256-263
张立超，胡晋红，左之谦，等.盐酸氨溴索口腔崩解片的制备及质量评价[J].中国新药杂志，2006，15(9):702-704
陈晓萍，陈春生，方琪.氨溴索治疗慢性阻塞性肺疾病的临床疗效观察[J].中国基层医药，2006，13(5): 831
佟娟.氨溴索治疗慢性喘息型支气管炎疗效观察[J].中国煤炭工业医学杂志，2006，9(9):933
王洁.沐舒坦治疗新生儿吸入性肺炎的疗效观察[J].山西医科大学学报，2006，37(5): 546-547
秦亚玲.沐舒坦化痰疗效分析[J].中国冶金工业医学杂志，2006，23(3): 302
徐红蓉，汪红，陈伟力，等.氨溴索分散片在健康志愿者的药代动力学和生物等效性[J].中国临床药理学杂志，2006，22(3):180-183
刘书铭，周远大.盐酸氨溴索口腔崩解片人体生物等效性研究[J].中国药房，2006，17(12):923-925