课题背景：近几年，固体脂质纳米粒作为抗癌药物、局部皮肤给药、肽和基因载体已成为研究的热点。在前期工作中我们采用改良的乳化蒸发-低温固化法成功制备了鬼臼毒素-固体脂质纳米粒，并对其质量和皮肤毒理学进行了初步实验研究。本实验在此基础上进一步比较了0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒与0.5%鬼臼毒素酊剂经皮外用的安全性，为克服鬼臼毒素酊剂在临床应用的局限性开辟一条新思路。

同行评价：选题紧密结合临床应用实际，观察鬼臼毒素－固体脂质纳米粒与鬼臼毒素酊经皮外用的安全性，具有一定创新，结果对临床实际应用具有较好的参考价值。

偏倚或不足：由于受时间和样本量等条件的限制，课题并没有进行更长时间动物经皮外用的安全性观察和更大规模的动物实验研究，观察药物的浓度、剂量较局限，因而实验结果具有一定的局限性，同时没有对鬼臼毒素－固体脂质纳米粒透皮吸收机制以及药物在体内外的释放规律进行更深入的研究，这些都有待于在今后进一步的研究中逐步完善。

1柳州市人民医院皮肤科，广西壮族自治区柳州市 545001；南方医科大学南方医院， 2皮肤科，3药学部，广东省广州市 510515

张 敏★，男，1971年生，湖南省株洲市人，汉族，2007年南方医科大学毕业，硕士，主治医师，主要从事皮肤性传播疾病的研究。
Zhangmin689@
hotmail.com

摘要
目的：为了克服鬼臼毒素酊剂在临床应用的局限性，进行了鬼臼毒素-固体脂质纳米粒与鬼臼毒素酊经皮外用安全性比较的实验。
方法：实验于2006-09/2007-08在南方医科大学药学部实验室完成。①取豚鼠32只，按照随机数字表法分成0.5%鬼臼毒素－固体脂质纳米粒完整皮肤组和破损皮肤组、0.5%鬼臼毒素酊剂完整皮肤组和破损皮肤组，每组4只，分别进行单次和多次给药皮肤刺激试验。单次给药方法：豚鼠背部两侧对称脱毛后用手术刀片作#字划痕制作皮肤破损模型，采用同体左右侧自身对照法，左侧为受试区，分别取0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒混悬液及0.5%鬼臼毒素酊剂各0.1 mL均匀涂布于受试区，再以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区。分别于去除敷料和清洗受试物后1，24，48 h观察涂药部位有无红斑和水肿等情况，以及上述变化的恢复情况与时间。多次给药方法：皮肤处理方法、观察指标及评价指标同上，每日给药1次，连续给药14 d。②取大鼠100只，按照随机数字表法分成0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒、0.5%鬼臼毒素酊剂完整皮肤组和破损皮肤组及正常对照组，每组10只，分别进行急性和长期皮肤毒性试验。急性毒性试验方法：脱毛后，分别取0.5%鬼臼毒素固体-脂质纳米粒、0.5%鬼臼毒素酊剂1 mL均匀涂布于脱毛区，连续观察14 d，每日观察大鼠体质量、进食量、呼吸、体态、眼、中枢神经系统、四肢活动、粪便性状及死亡情况。长期毒性试验方法：皮肤处理方法及观察指标同上，每日给药1次，药量均为0.1 mL，连续给药30 d，末次给药后24 h麻醉后处死动物，取血3.0~4.0 mL进行血液学、血液生化学检查，然后切取各组大鼠涂药中心区域的皮肤组织行皮肤病理检查及激光共聚焦显微镜扫描。
结果：纳入大鼠100只、豚鼠32只，均进入结果分析。①单次和多次给予鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠完整和破损皮肤均无刺激作用。②单次大剂量给予0.5%鬼臼毒素酊剂对豚鼠完整皮肤无刺激性，对破损皮肤有较强的刺激性；每日小剂量给予0.5%鬼臼毒素酊剂对豚鼠完整皮肤、破损皮肤均有较强的刺激性，其中破损皮肤组豚鼠皮肤刺激性出现的最早和最严重。③单次大剂量应用0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒和0.5%鬼臼毒素酊剂时大鼠容易出现短期的系统吸收毒性，尤以皮肤破损组症状较明显，其中0.5%鬼臼毒素酊剂组大鼠中毒症状持续时间均较0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组持久。④每日小剂量长期应用0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒和鬼臼毒素酊剂对大鼠比较安全无系统吸收毒性。⑤每日小剂量给予0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组大鼠于给药后的18~25 d，均出现轻度的皮肤红斑、水肿、糜烂和结痂等炎症反应及局部毛发生长稀疏、缓慢或无毛发生长，皮肤组织病理学检查可见以表皮为主的急性炎症反应。激光共聚焦显微镜扫描可见以红色荧光显像的药物主要富集于表皮层及毛囊而真皮及皮下组织药物含量相对较少。⑥每日小剂量给予0.5%鬼臼毒素酊剂组大鼠于给药后的4~7 d，均出现程度逐渐加重的皮肤红斑、水肿、糜烂、坏死、结痂及明显的毛发生长障碍，皮肤组织病理学检查可见皮肤全层急性炎症反应，激光共聚焦显微镜扫描可见表皮全层坏死，以红色荧光显像的药物主要富集于真皮、皮下组织、毛囊及其周围，荧光强度相对较0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组强。
结论：在有效观察时间和一定浓度范围内，鬼臼毒素-固体脂质纳米粒、鬼臼毒素酊剂对实验动物均无严重系统吸收毒性，但鬼臼毒素-固体脂质纳米粒与鬼臼毒素酊剂相比具有局部不良反应少，不良反应程度轻，不良反应出现迟，皮肤靶向性好等优点。
关键词：固体脂质纳米粒；鬼臼毒素；酊剂；安全性

张敏，曾抗，李国锋，古东风，江中洪．鬼臼毒素-固体脂质纳米粒与鬼臼毒素酊经皮外用的安全性比较[J].中国组织工程研究与临床康复，2008，12(1):103-107 [www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-1/1k-103(ps).pdf]

中图分类号:R318.08
文献标识码:A
文章编号:1673-8225
(2008)01-00103-05

收稿日期：2007-10-13
修回日期：2007-11-09
(07-50-10-5544/M·Q)

Safety of podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles versus podophyllotoxin tincture applied on skins

Abstract

AIM:To compare the safety of podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles and podophyllotoxin tincture applied on skins in order to overcome the limitation of podophyllotoxin tincture in clinic.
METHODS：Experiments were performed at the Laboratory of Pharmacology of Southern Medical University from September 2006 to August 2007. ①Thirty-two guinea pigs were selected and assigned into 0.5% podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles and 0.5% podophyllotoxin tincture intact skin group and dermal injury group by random digits table method，4 in each group. These guinea pigs received single and multiple dosing skin stimulus tests.Single dosing methods：After bilateral symmetric depilation，back of guinea pigs was cut as "#"shape by operating knife blade till staxis.In homobody left and right sides own control test，left side was as test region.Self-made monolayer plastic film and double layer gauze were used to wrap the test region.Medicine-treated with or without erythema and edema was observed at hours 1，24 and 48 after removing dressing and cleaning test region.The recovery of above-mentioned changed and time were recorded.Multiple dosing methods：treatment approach，observational index and evaluation index were the same as above-mentioned data，administering once a day for 14 days successively.②100 rats were selected and divided into 0.5% podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles and 0.5% podophyllotoxin tincture intact skin group，dermal injury group and normal control group，with 10 in each group.These rats received acute and long-term dermal toxicity test.Acute toxicity test method：After depilation，0.5% podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles suspension and 0.5% podophyllotoxin tincture (1 mL) evenly spread on test region, observed for 14 days successively.Body mass，food-intake，respiration，body carriage，eye，central nervous system，activity of limbs，excrement and death of rats were recorded every day.Long-term toxicity test methods：dermal disposal method and observational index were the same as above-mentioned data，0.1 mL dosing once a day for 30 days successively.After last administration，animal were killed 24 hours after anaesthesia and 3.0-4.0 mL blood was collected for hematology，blood biochemical analysis，and then dermal pathology tests were performed and a confocal laser scanning microscope was used to scan with skin slice from the center district of the smeared skin.
RESULTS： 100 rats and 32 guinea pigs were involved in the result analysis.①There was no irritant dermal reaction in intact or injured skin by single or repeated applications of podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles in guinea pigs.②There was no irritant dermal reaction in intact skin by single large-dose application of 0.5% podophyllotoxin tincture in guinea pigs.There was obviously irritant dermal reaction in injured skin by single large-dose application of 0.5% podophyllotoxin tincture.There was obviously irritant dermal reaction in intact and injured skin by repeated applications of 0.5% podophyllotoxin tincture.Among them stimulating emergence of a guinea pig of damaged skin groups was of the earliest stage and serious.③Short date of systemic absorbing toxicity was easily observed by single large-dose application of 0.5% podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles and 0.5% podophyllotoxin tincture in rats，which were even obvious in injured skin groups.The duration of toxic symptom was longer in rats taking 0.5% podophyllotoxin tincture than those taking 0.5% podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles. ④No long-term systemic toxic reaction was obviously observed by low-dose everyday applications of 0.5% podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles and 0.5% podophyllotoxin tincture in rats.⑤Mild erythema，edema，erosio， scab and hair growth obstacle appeared by low-dose everday applications in the 0.5% podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles group 18-25 days after administration.Acute inflammatory reaction was primarily observed in the epidermis histopathology test.Medicine was mainly enriched to gather in the epidermis layer，hair follicle and its surroundings in rats of podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles groups under the confocal laser scanning microscope, but medicine content was very few in dermis and subcutaneous tissue.⑥Increasingly serious erythema，edema，erosio，necrosis, scab and hair growth obstacle appeared by low-dose everyday applications in the 0.5% podophyllotoxin tincture group 4-7 days after administration.A severe whole layer skin inflammatory reaction was observed in epidermis histopathology test.A whole layer necrosis and medicine was mainly enriched to gather in the dermis layer，subcutaneous tissue，hair follicle and its surroundings in rats of podophyllotoxin tincture groups under the confocal laser scanning microscope, but fluorescence strength was stronger than 0.5% podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles group.
CONCLUSION：Within the certain survey period and concentration，no serious systemic absorbing toxicity to experimental animal of podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles and podophyllotoxin tincture，but compared podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles and podophyllotoxin tincture，the former has some advantages such as the little partial reaction，light reaction degree，late adverse reaction and good skin target.

Zhang M，Zeng K，Li GF，Gu DF，Jiang ZH. Safety of podophyllotoxin-solid lipid nanoparticles versus podophyllotoxin tincture applied on skins.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2008;12(1):103-107(China)
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles//08-1/1k-103 (ps).pdf]

0 引言

0.5%鬼臼毒素酊剂是WHO推荐治疗尖锐湿疣的一线外用药物[1]。固体脂质纳米粒是近年皮肤靶向性药物载体研究的热点[2-3]。在前期工作中我们采用改良的乳化蒸发－低温固化法成功制备了鬼臼毒素－固体脂质纳米粒，并对其质量和皮肤毒理学进行了初步实验研究[4-5]，以此为基础本实验又进一步比较了0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒与0.5%鬼臼毒素酊剂经皮外用的安全性。

1 材料和方法

设计：随机分组设计、动物对照观察。
单位：柳州市人民医院皮肤科、南方医科大学南方医院皮肤科和药学部。
材料：实验于2006-09/2007-08在南方医科大学药学部实验室完成。选择SPF级Wistar大鼠100只，体质量200~250 g，雌雄各半； SPF级Fmmu豚鼠32只，体质量350~400 g，雌雄各半，均由南方医科大学实验动物中心提供（合格证号分别为：2005A048，2005A041）。
药物：0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒，0.5%鬼臼毒素酊剂（南方医科大学药学部提供）。仪器：CELL-DYN1700型血球计数仪（美国）；7071A全自动生化检测仪（日本日立公司）；脱水机、切片机（英国Shandon公司）；Leica Tcs Sp2型激光共聚焦显微镜（德国Leica公司）。
设计、实施、评估者：设计及实施为第一、二作者，评估为全部作者，均经过专业培训。
方法：
豚鼠皮肤刺激性试验：①急性皮肤刺激试验：取豚鼠16只，按随机数字表法分成4组，即0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒完整皮肤组、0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒破损皮肤组、0.5%鬼臼毒素酊剂完整皮肤组和0.5%鬼臼毒素酊剂破损皮肤组，每组4只。实验开始前24 h将豚鼠背部两侧对称脱毛，脱毛面积左、右各3 cm×3 cm。破损皮肤组豚鼠用手术刀片在脱毛皮肤区域作#字划痕，以渗血为度。采用同体左右侧自身对照法，左侧为受试区，分别取0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒混悬液及0.5%鬼臼毒素酊剂各0.1 mL均匀涂布于受试区，右侧为空白对照区，再以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区。封包4 h后分别于去除敷料和清洗受试物后1，24，48 h观察涂药部位有无红斑和水肿等情况，以及上述变化的恢复情况与时间，按照每天每只动物平均积分=∑（红斑和水肿总积分/受试动物数）和参照文后参考文献[6]表12-1与12-2进行皮肤反应积分和刺激强度评价。②多次皮肤刺激试验：另取豚鼠16只，分组、皮肤处理方法、观察指标及评价指标同急性皮肤刺激试验，每日给药1次，连续给药14 d。
大鼠皮肤毒性试验：①急性皮肤毒性试验：取大鼠50只，按随机数字表法分成5组，即0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒完整皮肤组、0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒破损皮肤组、0.5%鬼臼毒素酊剂完整皮肤组和0.5%鬼臼毒素酊剂破损皮肤组及正常对照组，每组10只。给药前24 h将大鼠背部两侧对称脱毛，脱毛面积为6 cm×7 cm。破损皮肤组大鼠用手术刀片在脱毛皮肤区域作#字划痕，以渗血为度。然后分别取0.5%鬼臼毒素－固体脂质纳米粒、0.5%鬼臼毒素酊剂1 mL均匀涂布于脱毛区，再以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区，4 h后去除敷料和清洗受试物。连续观察14 d，每日观察大鼠体质量、进食量、呼吸、体态、眼、中枢神经系统、四肢活动、粪便性状及死亡情况。②长期皮肤毒性试验：另取大鼠50只，分组、皮肤处理方法及观察指标同急性皮肤毒性试验，每日给药1次，药量均为0.1 mL，连续给药30 d，末次给药后24 h用0.6~1.0 mL的水合氯醛麻醉动物，取腹主动脉血3.0~4.0 mL进行血液学、血液生化学检查，然后用颈椎脱臼法处死动物。分别切取各组大鼠涂药中心区域的皮肤组织，大小约0.5 cm×0.5 cm，固定于10%甲醛溶液中，将固定24 h的皮肤组织进行冲水、脱水、透明、浸蜡、包埋，然后用常规石蜡切片技术进行连续切片，片厚4~6 μm，选取来自同一动物标本的组织切片各2张，分别给予苏木精-伊红染色、封固行组织病理检查和不染色、不封固行激光共聚焦显微镜扫描，以观察在给药结束后各组皮肤组织病理变化和鬼臼毒素在皮肤各层的分布特点。激光共聚焦显微镜激发光谱为紫外光，扫描波长为620~700 nm，荧光呈现红色，荧光强弱间接定量荧光药物。
主要观察指标：豚鼠皮肤刺激性试验结果，大鼠皮肤毒性试验结果。
统计学分析：由第一作者采用以SPSS 10.0进行数据处理，计量资料以_x±s表示，行t检验。

2 结果

2.1 实验动物数量分析 纳入大鼠100只，豚鼠32只，均进入结果分析，无脱落。
2.2 豚鼠皮肤刺激试验结果
2.2.1 急性皮肤刺激试验结果 0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒完整皮肤和破损皮肤组、0.5%鬼臼毒素酊剂完整皮肤组豚鼠在去除敷料和受试物的1~48 h，受试区皮肤均未见红斑和水肿等情况，皮肤刺激反应平均评分值均为0，皮肤刺激强度评价均为无刺激性。0.5%鬼臼毒素酊剂破损皮肤组豚鼠在去除敷料和受试物的1~24 h，破损区皮肤及其周围均出现轻度的红斑和水肿，至48 h红斑、水肿达高峰，此后的2~5 d刺激反应逐渐消退，皮肤刺激反应平均评分值为2.75，皮肤刺激强度评价为轻度刺激性。试验结果说明：在有效观察时间内，单次给予0.5%鬼臼毒素－固体脂质纳米粒对豚鼠完整和破损皮肤均无刺激性。单次给予0.5%鬼臼毒素酊剂对豚鼠完整皮肤无刺激性，对破损皮肤有较强的刺激性。
2.2.2 多次皮肤刺激试验结果 0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒完整皮肤和破损皮肤组豚鼠在去除敷料和受试物的1~48 h，受试区皮肤均未见红斑和水肿等情况，皮肤刺激反应平均评分值均为0，皮肤刺激强度评价均为无刺激性。0.5%鬼臼毒素酊剂完整皮肤组豚鼠于给药后的4~7 d皮肤出现轻度红斑、水肿，此后逐渐加重，并出现轻度糜烂、结痂，于停药后5~10 d皮肤恢复正常，皮肤刺激反应平均评分值为6.25，皮肤刺激强度评价为强刺激性。0.5%鬼臼毒素酊剂破损皮肤组豚鼠于给药后的1 d内皮肤破损区及其周围即出现红斑、水肿，此后范围增大、程度加重，并出现破损区创面不愈合及部分皮肤坏死、结痂，于停药后7~14 d皮肤恢复正常，皮肤刺激反应平均评分值为7.0，皮肤刺激强度评价为强刺激性。试验结果说明：在有效观察时间内，多次给予0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠皮肤均无刺激性。多次给予0.5%鬼臼毒素酊剂对豚鼠完整皮肤、破损皮肤均有较强的刺激性，其中破损皮肤组豚鼠皮肤刺激性出现的最早和最严重。
2.3 大鼠皮肤急性毒性试验结果 单次大剂量给予受试物后，2周内各组大鼠均无死亡现象。给予0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒混悬液的完整和破损皮肤组大鼠及给予0.5%鬼臼毒素酊剂的完整和破损皮肤组大鼠，分别于给药后的前3，8，4，10 d出现体质量减轻、食欲下降、反应迟钝、粪便色浅及活动减少，尤以皮肤破损组表现较明显，以后逐渐恢复。观察结束时0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒皮肤破损组、0.5%鬼臼毒素酊剂皮肤破损组大鼠体质量增长与正常对照组比较差异具有显著性（表1），而其他各组观察指标未见异常。试验结果说明：在一定观察时间内，0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒和0.5%鬼臼毒素酊剂单次大剂量应用时大鼠容易出现短期的系统吸收毒性，尤以皮肤破损组症状较明显，其中0.5%鬼臼毒素酊剂组大鼠出现中毒症状均较0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组持久。

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2.4 大鼠皮肤长期毒性试验结果 每日给予小剂量受试物连续30 d后，各组大鼠均未见动物死亡，末次给药后24 h血液学、血液生化学检查结果各组间差异均无显著性意义（P > 0.05）。
0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒两组大鼠：①给药后的18~25 d，均出现轻度的皮肤红斑、水肿、糜烂和结痂等炎症反应及局部毛发生长稀疏、缓慢或无毛发生长。②皮肤组织病理学检查可见表皮全层或部分变性、坏死，大量中性粒细胞浸润，真皮、皮下组织及毛囊结构完整，有轻、中度中性粒细胞浸润和部分毛细血管内皮细胞肿胀。③CLSM扫描可见以红色荧光显像的药物主要富集于表皮层及毛囊，而真皮及皮下组织药物含量相对较少（图1）。④其余各项观察指标与正常对照组比较均未见明显异常。
0.5%鬼臼毒素酊剂两组大鼠：①给药后的4~7 d，均出现轻度的皮肤红斑、水肿，随用药时间延长，炎症反应逐渐加重，并出现严重糜烂、结痂及皮肤坏死，毛发生长障碍较0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒两组更明显、更广泛。②皮肤组织病理学检查可见表皮全层坏死，真皮、皮下组织、毛囊及其周围部分变性、坏死，有大量中性粒细胞浸润，部分毛细血管内皮细胞变性，血管内可见微血栓形成。③CLSM扫描可见表皮全层坏死，以红色荧光显像的药物主要富集于真皮、毛囊及其周围，荧光强度相对较0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒两组强，皮下组织也可见较多药物荧光（图2）。④其余各项观察指标与正常对照组比较均未见明显异常。

试验结果说明：①在一定观察时间和药物浓度范围内，小剂量长期应用0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒和鬼臼毒素酊剂对大鼠比较安全无系统吸收毒性。②应用0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒时大鼠可出现轻度以表皮为主的皮肤急性炎症反应并可有毛发生长障碍。③应用0.5%鬼臼毒素酊剂时大鼠可出现重度皮肤全层急性炎症反应及明显毛发生长障碍。④鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组大鼠药物主要富集于表皮层和毛囊及其周围而真皮及皮下组织药物含量相对较少，较鬼臼毒素酊剂组具有良好的皮肤靶向性。

3 讨论

由于0.5%鬼臼毒素酊剂常出现与表皮腐蚀有关的轻度皮肤灼痛、触痛，甚至疣体广泛坏死引起的剧痛[7]，并缺乏对病毒感染组织特异的选择作用，常造成正常组织的损伤[8]，因而限制了其在临床进一步应用。因此，鬼臼毒素新剂型的研究和开发已成为人们关注的热点[9-12]。固体脂质纳米粒是20世纪90年代初发展起来的新一代亚微粒给药系统，是指粒径在10~1 000 nm之间的固态胶体颗粒[13]，它是近年皮肤靶向性药物载体研究的热点[2-3]，局部给药具有生理相容性好、可控制药物释放、良好的皮肤靶向性[14-15]、可避免化学不稳定药物的降解及减少药物对皮肤的刺激作用等多种优点[16]，因此，固体脂质纳米粒作为药物载体应用于经皮给药系统具有良好的发展前景。
通常男性阴茎湿疣一次应用0.5%鬼臼毒素酊剂的剂量小于70 μL[17]，本实验中以大于常规阴茎湿疣一次酊剂用量的鬼臼毒素－固体脂质纳米粒混悬液各1 mL，0.1 mL，0.1 mL，0.1 mL分别进行大鼠皮肤急性毒性试验、大鼠长期皮肤毒性试验、豚鼠急性皮肤刺激试验、豚鼠多次皮肤刺激试验，并以0.5%鬼臼毒素酊剂作为对照，研究结果表明，在有效观察时间和一定浓度范围内，鬼臼毒素－固体脂质纳米粒、鬼臼毒素酊剂对实验动物均无严重系统吸收毒性，但鬼臼毒素－固体脂质纳米粒与鬼臼毒素酊剂相比具有局部不良反应少，不良反应程度轻，不良反应出现迟，皮肤靶向性好等优点。
实验中，未观察到鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠皮肤有刺激反应，考虑可能与鬼臼毒素被固体脂质纳米粒包裹后，避免或减少了其与皮肤直接接触而致缺乏皮肤刺激或刺激强度不足有关。在大鼠皮肤急性毒性试验中，皮肤破损组大鼠容易出现较早、较明显的系统中毒症状，且0.5%鬼臼毒素酊剂组大鼠中毒症状持续时间均较0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组持久，说明破溃皮肤有助于鬼臼毒素-固体脂质纳米粒和鬼臼毒素酊剂的经皮吸收，从而导致系统吸收毒性。另一方面也说明鬼臼毒素被固体脂质包裹后可能具有缓慢释药效应，导致单位时间内鬼臼毒素局部释放量较鬼臼毒素酊剂少而系统吸收毒性小。鬼臼毒素尚有导致皮肤血管内皮细胞受损，诱导局部白细胞介素1、白细胞介素2的表达和刺激巨噬细胞活化、增殖等多种生物学活性[18]，这可能是长期应用鬼臼毒素出现皮肤炎症反应的直接原因。因此在疗效肯定的情况下，间歇应用一定浓度范围内的鬼臼毒素-固体脂质纳米粒可能是更为合理的方法。文献报道鬼臼毒素自身具有荧光性[19]，这为我们应用CLSM扫描研究鬼臼毒素在皮肤的分布规律提供了理论依据。本试验中，采用CLSM扫描发现鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组中药物主要富集于大鼠表皮层和毛囊及其周围而真皮及皮下组织药物含量较少，与鬼臼毒素酊剂组相比具有较好的皮肤靶向性。同时0.5%鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组和鬼臼毒素酊剂组均出现了毛发生长障碍，说明毛囊也是鬼臼毒素透皮吸收的途径，鬼臼毒素对毛囊的细胞毒性进而导致了毛发的生长障碍。

4 参考文献

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