糖尿病患者血管内皮细胞活性因子变化：接受金芪降糖片干预的效应

糖尿病患者血管内皮细胞活性因子变化：接受金芪降糖片干预的效应
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徐军，齐法莲，陈英剑，尹秋霞，克丙申，胡成进

相关链接：研究表明金芪降糖片能有效治疗2型糖尿病，与西药联合应用能明显改善糖尿病患者的血糖和血脂及胰岛素抵抗，但它对血管内皮细胞的功能与作用报道甚少。

应用要点：本文结果证实金芪降糖片可通过降低糖尿病患者血浆中血管内皮细胞活性因子水平，起到保护血管内皮细胞作用，并有效延缓糖尿病合并症的发生和发展。

同行评价：文章观察中西医结合治疗前后糖尿病患者血中多种血管内皮细胞因子水平的变化，了解金芪降糖片对于血管内皮细胞的功能与作用，具有一定创新性。

徐军，女，1954年生，山东省济南市人，汉族，1975年总后军医学校毕业，副主任技师，主要从事细胞免疫和细胞因子的临床研究。
wqxj7767@sina.
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摘要
目的:细胞因子可作用于血管内皮细胞，在糖尿病的血管病变中起重要作用。通过观察金芪降糖片治疗前后血管内皮细胞损伤相关因子的变化，探讨金芪降糖片对糖尿病患者血管内皮细胞活性因子的影响及临床应用价值。
方法：①对象：选择2005-03/2006-09在解放军济南军区总医院内分泌科就诊的2型糖尿病患者63例；金芪降糖片由天津中新药业隆顺榕制药厂生产。②分组：患者随机被分为两组：对照组30例，男19例，女11例，平均年龄（56.6±8.9）岁；金芪组33例，男20例，女13例，平均年龄（58.4±7.7）岁。③给药：对照组用常规西药双胍类等降糖药物治疗；金芪组在西药治疗基础上加服金芪降糖片8片，3次/d，连续治疗3个月。④评估：采用ELISA检测两组患者治疗前后血浆中内皮素1、可溶性细胞间黏附分子1、可溶性P-选择素和肿瘤坏死因子α内皮细胞活性因子水平，以及血糖、血脂、糖基化血红蛋白等各项指标的变化。
结果：63例患者全部进入结果分析。①与治疗前比较，治疗后金芪组血糖和血脂、糖基化血红蛋白均有显著变化（P < 0.05），对照组仅血糖有明显变化（P < 0.05）；与对照组治疗后比较，金芪组血糖、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇都有明显改善（P < 0.05）。②与治疗前比较，金芪组治疗后患者血浆中细胞因子水平均显著降低（P < 0.05或P < 0.01），对照组4项指标水平皆无明显变化（P > 0.05）；与对照组治疗后比较，金芪组患者血浆中内皮素1、可溶性细胞间黏附分子1、可溶性P-选择素和肿瘤坏死因子α水平均显著降低（P < 0.01）。
结论：①金芪降糖片可通过降低糖尿病患者血浆中血管内皮细胞活性因子水平，起到保护血管内皮细胞的作用。②中西医结合治疗糖尿病，能有效地延缓糖尿病合并症的发生和发展。
关键词：中药疗法；糖尿病；胞间粘附分子1；P选择素；肿瘤坏死因子α

徐军，齐法莲，陈英剑，尹秋霞，克丙申，胡成进.糖尿病患者血管内皮细胞活性因子变化：接受金芪降糖片干预的效应[J].中国组织工程研究与临床康复，2008，12(11):2025-2028 [www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-11/11k-2025(ps).pdf]

中图分类号:R329.412
文献标识码:B
文章编号:1673-8225
(2008)11-02025-04

Changes in vascular endothelial cell active factors in patients with diabetes mellitus: Effects of Jinqi hypoglycemic tablets

AIM:Cytokine plays an important role in vasculopathy of diabetes mellitus by affecting vascular endothelial cells. This article evaluates the influence and clinical application of Jinqi hypoglycemic table on vascular endothelial cells active factor of patients with diabetes mellitus by observing the change of correlation factor about vascular endothelial cells damage before and after therapy.
METHODS: ①Sixty-three cases of type 2 diabetes mellitus from Department of Endocrinology of General Hospital of Jinan Military Area Command of Chinese PLA were selected from March 2005 to September 2006. Jinqi hypoglycemic table was produced by Tianjin Long Shuen Rong Development Pharmaceutical Co. LTD China. ②The diabetes mellitus patients were randomly divided into two groups, a control group, with 30 cases, including 19 males and 11 females, mean age of (56.6±8.9) years, and a Jinqi group, with 33 cases, including 20 males and 13 females, mean age of (58.4±7.7) years. ③The patients in the control group were treated with routine biguanides hypoglycemic medicine. Jinqi hypoglycemic tablets were used besides western medicine in the Jinqi group, 8 tables, three times a day for successively 3 months. ④ELISA was used to detect plasma endothelin, soluble intercellular adhesion molecule-1 and soluble P-selectin and tumor necrosis factor alpha levels before and after treatment. Meanwhile the levels of blood glucose, blood lipid and HbAlc were detected.
RESULTS: Sixty-three patients were involved in the result analysis. ①Blood glucose, lipids and glycosylated hemoglobin were changed significantly (P < 0.05) after Jinqi treatment, while only blood glucose changed in control group (P < 0.05). Blood glucose, triglyceride, low-density lipoprotein cholesterol and high-density lipoprotein cholesterol were improved in the Jinqi group after treatment (P < 0.05). ②Plasma cytokine levels were decreased in the Jinqi group after treatment (P < 0.05 or P < 0.01). No significant differences were found in the four indexes in the control group (P > 0.05). Plasma endothelin 1, soluble intercellular adhesion molecule-1, soluble P-selectin and tumor necrosis factor alpha levels were significantly reduced in the Jinqi group after treatment as compared with the control group (P < 0.01).
CONCLUSION: ①Jinqi hypoglycemic tablet can protect vascular endothelin through regulating vascular endothelial cells active factor. ②Development of complications in diabetes mellitus patients can be effectively delayed using Chinese medicine on the basis of treatment with western medicine.

Xu J, Qi FL, Chen YJ, Yin QX, Ke BS, Hu CJ.Changes in vascular endothelial cell active factors in patients with diabetes mellitus: Effects of Jinqi hypoglycemic tablets.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2008;12(11):2025-2028(China) [www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-11/11k-2025(ps).pdf]

近年研究表明，2型糖尿病存在着细胞因子介导的急性时相反应[1]。细胞因子可作用于血管内皮细胞，在糖尿病血管病变的发生发展中起重要作用。金芪降糖片能有效的治疗2型糖尿病，与西药联合应用能明显改善糖尿病患者的血糖和血脂，以及对胰岛素抵抗的作用，但它对血管内皮细胞的功能与作用报道甚少。通过观察中西医结合治疗前后糖尿病患者血中多种血管内皮细胞因子水平的变化，了解金芪降糖片对于血管内皮细胞的功能与作用。

设计：随机对照观察。
单位：解放军济南军区总医院实验诊断科。
对象：选择2005-03/2006-09解放军济南军区总医院内分泌科就诊的2型糖尿病患者63例。诊断标准根据1999年WHO制定的糖尿病诊断分型标准。纳入标准：①糖尿病诊断标准参照1999年世界卫生组织制定的2型糖尿病诊断标准。②患者对治疗知情，均同意参加本试验。排除患有其他严重的躯体和精神疾病患者。糖尿病患者随机分为两组：对照组30例，男19例，女11例，平均年龄（56.6±8.9）岁；金芪组33例，男20例，女13例，平均年龄（58.4±7.7）岁。
药品：金芪降糖片（由天津中新药业隆顺榕制药厂生产，批号：0503066，批准文号：国药准字Z10920027）。
设计、实施、评估者：设计为第一作者，实施为第一、二作者，评估为第三作者，均接受过专业培训。
技术路线：
给药方法：对照组，用常规西药双胍类药和磺尿类药，或双胍类药和拜糖苹等降糖药物治疗；金芪组，在西药治疗基础上加服金芪降糖片8片，3次/d，连续治疗3个月。
观察指标与测定方法：患者于治疗前和治疗后3个月采血。分别检测空腹血糖、餐后2 h血糖、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和糖基化血红蛋白，同时采空腹血6 mL，分离血浆，-70 ℃ 冻存备用。
空腹和餐后2 h血糖用德国罗氏优越快速血糖仪测定；血脂用AU2700奥林巴斯全自动生化分析仪检测；内皮素1、可溶性细胞间黏附分子1、可溶性P-选择素和肿瘤坏死因子α水平测定采用ELISA双抗体夹心法，试剂盒均为美国TPI公司生产。用奥地利产SLT.SPECTRA-1酶联仪进行测定，根据标准曲线得出相应浓度。
主要观察指标：①治疗前后两组患者血浆中血糖和血脂比较。②金芪降糖片对各种血管内皮细胞因子的作用。
统计学分析：所有数据以_x±s表示。由第一作者应用Excel 97软件进行处理，各组间差异显著性分析采用t检验，计量资料间相关性使用相关系数分析。

2.1 参与者数量分析纳入患者63例，分为2组，全部进入结果分析。
2.2 治疗前后两组患者血浆中血糖和血脂比较见表1。

对照组仅血糖有明显变化（P < 0.05），糖基化血红蛋白和血脂无变化；金芪组治疗后血糖、糖基化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇均有显著变化（P < 0.05）；治疗前两组间比较，各项指标差异均无显著性，治疗后两组比较，金芪组比对照组血糖、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇都有明显改善（P < 0.05）。
2.3 金芪降糖片对各种血管内皮细胞因子的作用见表2。

与治疗前比较，治疗后金芪组患者血浆中细胞因子水平均显著降低，分别为内皮素1 P < 0.05，可溶性细胞间黏附分子1、可溶性P-选择素和肿瘤坏死因子α P < 0.01，对照组4项指标水平皆无明显变化（P > 0.05）；与对照组比较，治疗后金芪组患者血浆中内皮素1、可溶性细胞间黏附分子1、可溶性P-选择素和肿瘤坏死因子α水平均显著降低（P < 0.01）。

内皮细胞的连接是维持血管完整性、调节白细胞渗出和血管通透性的结构基础[2-3]。内皮细胞膜受体感知血液动力学变化和血液传递的信号，并在受刺激后合成和分泌多种血管活性物质，在局部作用于血管发挥生物效应[4]。Pinkney 等[5]认为血管内皮功能不仅与胰岛素抵抗相关，而且是导致胰岛素抵抗的重要原因。
血浆可溶性P-选择素增加是血小板和血管内皮细胞活化的标志。血中可溶性P-选择素水平升高，致使血粘稠度升高，形成微血管血栓及微循环障碍，引起组织缺氧，微血管病变，肾脏功能损伤[6]。细胞间黏附分子1是一种细胞表面跨膜蛋白，正常情况下细胞间黏附分子1很少表达或不表达，当受到刺激后可表达于多种细胞上，尤其是以血管内皮细胞表达最强，在炎症和免疫性疾病中发挥着重要作用。炎症过程一个重要的分子基础是白细胞与血管内皮细胞黏附分子的相互作用。P-选择素和细胞间黏附分子1均属于黏附分子的重要组成部分[7]。有研究表明高血糖可增加某些炎性细胞因子和黏附分子表达[8]。肿瘤坏死因子α是一种多效应的细胞因子。近年来研究证明肿瘤坏死因子α与胰岛素抵抗及血脂代谢紊乱的发生关系密切。发现肿瘤坏死因子α第308 G/A基因突变与中国北方2型糖尿病患者的胰岛素抵抗及血脂水平异常有关[9]。在肥胖的2型糖尿病患者中肿瘤坏死因子α水平增加，并与空腹胰岛素水平和胰岛素抵抗指数相关[10]。肿瘤坏死因子α的水平与血糖、空腹胰岛素、总胆固醇、甘油三酯呈正相关。内皮素是已知最强的血管内皮收缩因子，内皮素主要分布于血管内皮细胞系统，是机体血压稳定及血循环功能正常的关键物质。生理状态下内皮素浓度极低，当动脉粥样硬化引起缺血、缺氧，造成血中内皮素明显增高，它在动脉粥样硬化的病理过程中起重要作用。糖尿病状态下这些细胞因子的异常表达可介导血管内皮细胞与单核细胞黏附，引起内皮损伤，血管通透性增加，血小板聚集增多，以及血栓形成等，在糖尿病血管病变的发生发展中起重要作用[11]。
高血糖可加速氧化过程，氧化的低密度脂蛋白胆固醇可造成内皮细胞损伤，自由基形成增加，刺激细胞因子释放，从而诱导内皮细胞表面黏附分子的表达，如P-选择素、细胞间黏附分子1等；另外免疫活性细胞与动脉内膜中的内皮细胞作用，亦可产生肿瘤坏死因子α、内皮素等多种细胞因子，并形成网络，细胞因子过多地，持续地释放入血中[12]。糖尿病患者血管内皮细胞的广泛损伤和增殖以及各种因素对血管内皮细胞的刺激，使内皮细胞合成和释放内皮素增多，内皮素水平升高直接参与对糖尿病的病理变化，刺激血管平滑肌细胞促进细胞外基质合成，使血管内皮细胞进一步损伤，导致糖尿病加重。
糖尿病患者多为气阴两虚兼瘀，治疗时采用清热养阴、益气活血、调整阴阳的原则。金芪降糖片的主要成分为黄芪、黄连、金银花。它们的作用分别为：①黄芪是补气要药，药理研究证明黄芪有利尿、降压、消炎镇痛、抗自由基及抗氧化、抑制红细胞和血小板聚集，减少血栓形成；黄芪在心血管疾病有诸多治疗作用，具有保护心肌、改善心功能和降低血压等功效[13]。黄芪能够提高内皮细胞表面整合素活性，促进血管内皮细胞修复，降低血管张力，稳定细胞膜，改善心肌营养和心肌细胞线粒体功能，从而改善冠状动脉供血；黄芪多糖对血糖有双向性调节作用，通过改善糖尿病患者的糖代谢、脂代谢，以及显著降低心肌局部的血管紧张素Ⅱ水平，起到保护心肌细胞和调节血糖的作用[14]。②黄连性寒苦，主清心胃之火，其主要成分小檗碱对心脑血管系统、血糖、及肝脏等多方面具有药理作用。小檗碱的降血糖作用特点与二甲双胍作用类似，属于胰岛素增敏剂范畴，通过增加肝细胞的葡萄糖消耗，促进肝糖原合成，而发挥其非胰岛素依赖降糖作用；黄连还可促进胰岛细胞再生和功能恢复、降低血清中胆固醇、三酰甘油含量改善脂代谢紊乱。③金银花性寒，味甘，具有清热解毒、凉血、止渴、通经活络之功效。金芪降糖片抗糖尿病的药理学作用有多方面：改善糖代谢，且降血糖维持时间较长；改善糖耐量，促进肝糖原合成；降低血乳酸；缓解脂质代谢异常；明显改善胰岛素抵抗性，恢复机体对胰岛素的敏感性，还有一定的增强体液免疫和细胞免疫的功能[15]。从本实验结果可看出金芪降糖片治疗后糖尿病患者血糖、糖基化血红蛋白、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均有显著改善（P < 0.05），进一步证实金芪降糖片在控制血糖与糖基化血红蛋白水平的同时，可降低血脂水平，从而有助于血糖的平稳控制。
2型糖尿病的发病机制除胰岛素分泌缺陷外，胰岛素抵抗也是其重要发病机制。胰岛素抵抗时动脉血管壁的炎症反应增强。一些炎症因子对胰岛素抵抗的发生起着重要作用。Shinozaki等[16]发现胰岛素抵抗大鼠动脉血管内皮细胞高表达细胞间黏附分子1、选择素E和P，致使大量白细胞进入动脉血管壁，它们激发动脉血管组织的炎症反应，并且分泌许多细胞因子而加重血管壁的炎症反应。肿瘤坏死因子α在介导胰岛素抵抗中起中心介质作用，它从不同层次，不同环节干扰胰岛素的生理功能。肿瘤坏死因子α可刺激血管内皮因子释放，使肾小球内皮细胞通透性增加，通过合成黏附分子及化学趋向物，促进白细胞合成，释放超氧化物和蛋白水解酶，引起组织损伤[17]。肿瘤坏死因子α的这些重要作用，使之成为连接胰岛素抵抗、代谢综合征、2型糖尿病和动脉粥样硬化的桥梁[18]。
改善胰岛素抵抗是金芪降糖片治疗糖尿病作用的主要机制之一，金芪降糖片在治疗糖尿病的同时，可改善与胰岛素抵抗有关的其他疾病[19]。在应用胰岛素促分泌剂治疗糖尿病的同时，合理地选用能改善胰岛素敏感性的金芪降糖片，能进一步提高胰岛素的降糖作用。本实验结果表明金芪降糖片治疗后患者血浆中内皮素1、可溶性细胞间黏附分子1、可溶性P-选择素和肿瘤坏死因子α细胞因子水平均显著降低，证实金芪降糖片在保护各脏器血管内皮细胞的同时，能明显改善心肌细胞和肝细胞功能，而常规双胍类药和磺尿类药对血管内皮细胞活性因子无作用，金芪降糖片的这些植物成分能拮抗糖激素，抑制醛糖还原酶，增加糖代谢，明显改善糖尿病患者血管内皮细胞活性因子水平，保护患者的血管内皮细胞，防治心、肾、视网膜等脏器的微血管病变。中西医结合治疗糖尿病能有效改善糖尿病症状，减少西药用量及其副作用，在防治各种糖尿病的并发症方面显示了良好的治疗前景[20]。

1 Pickup JC. Inflammation and activated innate immunity in the pathogenesia of type 2 diabetes. Diabeles Care 2004; 27(3): 813-23
2 Marszalek A,Daa T,Kashima K,et al.Ultrastructural and morphometric studies related to expression of the cell adhesion molecule PECAM-1/CD31 in developing rat lung. Histochem Cytochem 2000;48(9):1283- 1289
3 Ilan N,Cheung L,Pinter E,et al.Platelet-endothelial cell adhesion molecule-1 (CD31),a scaffolding molecule for selected catenin family members whose binding is mediated by different tyrosine and serine/threonine phosphorylation.Biol Chem 2000;275(28)21435-21443
4 Qu BZ,Wang HZ.Zhongguo Linchuang Kangfu 2005;9(35):132-134
屈宝泽,王化渊. 血管内皮功能与冠心病发生发展[J].中国临床康复，2005,9(35):132-134
5 Pinkney JH. Stehouwer CD, Coppack SW, et al. Endothelial dysfunction: cause the insulin resistance. Diabetes 1997; 46 Supp 2:s9-13
6 Li L.Fangshe Mianyixue Zazhi 2005;18(3):193-194
李林. 肺癌患者血浆P－选择素水平和CA50联检的临床意义[J].放射免疫学杂志，2005,18(3):193-194
7 Gu XQ,Chao X Fu YW,et al.Zhongguo Mianyixue Zazhi 2003; 19(10):713-715
谷欣权,曹霞,傅耀文,等.肾移植术后血清sICAM-1和sVCAM-1的动态监测及临床意义[J]. 中国免疫学杂志, 2003,19(10):713-715
8 Park CW, Kim JH, Lee JH, et al. High glucose-induced intercellular adhesion moteeule-1(ICAM-1) expression through an osmotic effect in rat mesangial cells is PKC-NF-kappa B-dependent. Diabetologia 2000; 43(12);1544-1553
9 Pan HY,Zhang PX,Ni FY,et al. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2006;10(40):72-74
潘红艳,张凭欣,倪福永,等. 肿瘤坏死因子α启动子区基因多态性与2型糖尿病的相关性[J].中国组织工程研究与临床康复,2006, 10(40):72-74
10 Mishima Y, Kuyama A, Tada A, et al .Relationship Between serum tumor necrosis factor-alpha and insulin resistance in obsess men with type 2diabetes mellitua. Diaberes Res Clin Pract 2001;52;119-123
11 Jage A, Van Hinsbergh VW, Kostense PJ. Increaseb levels of soluble vascular cell adhesion molecule-1 are associated risk of cardiovascular mortality in type 2 diabetes; the hoom study. Diaberte 2000;49; 485-491
12 Chen JF.Zhongguo Zhongxiyi Jiehe Jijiu Zazhi 2000;7(3):147-149
谌剑飞.糖尿病缺血性中风中医证型与血清炎症细胞因子关系的研究[J].中国中西医结合急救杂志, 2000,7(3):147-149
13 Chen ZK, Hu SJ.The experimental study progress of effect of Astragalus membraneaceus on cardiovascular diseases.Advances in Cardiovascular Diseases 2003,24:113-116
14 Cong L，Li YM，Yu MH,et al.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2006;10(7):64-66
丛丽,李益明,俞茂华,等.黄芪多糖对糖尿病心肌病变仓鼠心肌胶原表达的影响[J].中国组织工程研究与临床康复,2006,10(7):64-66
15 Zou CH,Shen ZF.Zhongcaoyao 2004,35(11): add 2
邹晨辉,申竹芳. 黄连生物碱药理抗糖尿病机制的研究[J].中草药, 2004,35(11):附2
16 Shinozaki K, Ayajiki K, Nishio Y, et al. Evidence for a causal role of the renin-angiotensin in vascular dysfunction associated with insulin resistance. Hypertension 2004;43:255-262
17 Erbageri A, Tarakcioglu M, Coskum Y,et al. Mediators of inflammation in children with type 1 diabetes mellitus; eytokines in type 1 diabetie children. Clin Biachem 2001;34(8);645-650
18 Chen SL, Luo M. Gouwai Yixue: Neifenmixue Fenche 2004;24(6): 376-378
陈述林,罗敏. 胰岛素抵抗的炎症机制[J]. 国外医学:内分泌学分册,2004,24(6):376-378
19 Shen ZF. Gouwai Yixue:Neifenmixue Fenche 2004; 24(4):215-216
申竹芳.金芪降糖片抗糖尿病的药理作用基础[J].国外医学:内分泌学分册, 2004，24(4):215-216
20 Xue XS, Huang ZW.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2006,10(35):151-154
谢席胜,黄宗文.中医结合治疗糖尿病的优势评价[J].中国组织工程研究与临床康复,2006,10(35):151-154