一氧化氮合酶抑制剂对白细胞介素1β诱导软骨细胞增殖和基质金属蛋白酶表达的影响*★

梁鹏展1，江建明1，刘传芳1，孙玮2，余磊3，邱小忠3

课题背景：课题为国家自然科学基金资助项目(30571890)。骨关节炎最终病理发展的结果是关节软骨的破坏，而国内外众多研究表明部分基质金属蛋白酶参与软骨的破坏。近年发现，在动物体内和体外，高表达的一氧化氮可加速骨关节炎软骨的破坏；那么，一氧化氮合酶抑制剂对人骨关节炎软骨细胞增殖和基质金属蛋白酶表达的影响如何？是否和在动物体内体外的实验结果相同？虽然，也在不少相关文献中，找到一些类似的见解，但是缺乏直接的证据。

相关链接：骨关节炎的致病过程涉及到数以百计的分子，并形成网络级联系统，这些分子之间相互影响，相互作用，通过多种激活途径，产生生物学效应。在这些细胞因子中究竟哪一个或哪一些在病理发展过程中是一个“关键点”；是否可以通过这些“关键点”细胞因子的抗体或受体的抑制剂来缓解病理发展过程。随着蛋白质组学技术的发展和应用，便利了该类问题的解决。

术语解析：xMAP技术：最新开发的liquichip workstation液相蛋白芯片系统就是一种新型的蛋白质研究分析平台。利用该系统，可以对同一样品中多个不同分子同时检测，这种检测技术被称为xMAP技术（flexible Muti-Analyte Profiling）。liquichip workstation有机地整合了有色微球、激光技术、应用流体学、最新的高速数学信号处理器和计算机运算法则。这些造就了它无与伦比的检测特异性、灵敏性及操作性。可以想像通过该技术，可以有效的进行骨关节炎相关生长因子和细胞因子的检测，横向比较其关联性，从而筛选骨关节炎致病关键因子。

1南方医科大学附属南方医院脊柱骨病外科，广东省广州市 510515；2深圳市第二人民医院脊柱外科，广东省深圳市 518035； 3南方医科大学解剖教研室，广东省组织构建与检测重点实验室，广东省广州市
510515

梁鹏展★，男，1980年生，河南省镇平县人，汉族，南方医科大学在读硕士，住院医师，主要从事脊柱和骨关节退变的研究。
lpzh204@yahoo.
com.cn

通讯作者：江建明，教授，博士生导师，南方医科大学附属南方医院脊柱骨病外科，广东省广州市
510515

国家自然科学基金资助项目(30571890)*

摘要
目的: 研究表明，白细胞介素1β对鼠肾细胞、心肌细胞和神经上皮细胞发挥抗增殖作用，但其是否可抑制人的软骨细胞增殖？这种抗增殖作用是否可被一氧化氮合酶抑制剂抑制尚不清楚。实验拟验证一氧化氮合酶抑制剂对人骨关节炎软骨细胞增殖及基质金属蛋白酶的影响。
方法：选择2006-05/12在南方医科大学附属南方医院脊柱骨病科住院的膝骨关节炎患者8例。所有患者均符合1986年美国风湿病学会关于骨关节炎的临床诊断标准或临床及放射学诊断标准，排除其他疾病（创伤性、风湿性及感染性）所导致的骨关节炎。所有患者均在术前告知，并签有试验知情同意书。分离培养关节软骨细胞，将不同浓度（0，1，10，100 μg/L，其中0 μg/L 作为对照）白细胞介素1β作用于骨关节炎软骨细胞24，48，72 h，一氧化氮合酶抑制剂氨基胍作为干扰因素，与白细胞介素1β共同作用72 h，收集细胞上清液，一氧化氮的表达量通过一氧化氮试剂盒检测，并作为检测一氧化氮合酶抑制剂活性的手段；四甲基偶氮唑盐法检测软骨细胞的增殖；xMAP技术检测软骨细胞基质金属蛋白酶1，基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的表达。
结果：①不同时间点1，10，100 μg/L 白细胞介素1β组作用后的吸光度值与对照组相比，差异显著（P < 0.05，P < 0.01）；相同浓度白细胞介素1β在24，72 h 的吸光度值相比较，差异显著(P < 0.01)。②白细胞介素1β和氨基胍(100 μmol/L)共同作用软骨细胞72 h后，各浓度组吸光度与白细胞介素1β组相比，差异显著（P < 0.01）。③白细胞介素1β可促进软骨细胞一氧化氮的表达，并呈剂量依赖关系。④白细胞介素1β促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达，与对照组相比，差异有显著性意义（P < 0.01），而软骨细胞基质金属蛋白酶9的表达在本实验中没有检测到。
结论：白细胞介素1β可抑制软骨细胞增殖，诱导基质金属蛋白酶表达，这些影响可被氨基胍抑制，白细胞介素1β和氨基胍对软骨细胞的影响可能是通过一氧化氮途径发挥作用。
关键词：软骨细胞；骨关节炎；白细胞介素1β；一氧化氮合酶抑制剂；一氧化氮；液相蛋白芯片

梁鹏展，江建明，刘传芳，孙玮，余磊，邱小忠. 一氧化氮合酶抑制剂对白细胞介素1β诱导软骨细胞增殖和基质金属蛋白酶表达的影响[J].中国组织工程研究与临床康复，2008，12(15):2820-2824
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-15/15k-2820(ps).pdf]

中图分类号:R684.3
文献标识码:A
文章编号:1673-8225
(2008)15-02820-05

Effects of nitricoxide synthase inhibitor on interleukin-1 beta-induced chondrocyte proliferation and matrix metalloproteinase expression

AIM: Studies have demonstrated that interleukin-1β (IL-1β) can inhibit the proliferation of rat renal cells, myocardial cells, and neuroepithelial cells. But whether it can inhibit human chondrocyte proliferation, and whether this inhibitory effect can be suppressed by nitricoxide synthase (NOS) are still uncertain. This study explored the effects of NOS inhibitor on chondrocyte proliferation and matrix metalloproteinase (MMP) in patients with osteoarthritis.
METHODS: Eight inpatients with osteoarthritis were selected from Department of Orthopaedics and Spine Surgery, Nanfang Hospital, Southern Medical University from May to December 2006. All subjects fulfilled the diagnosis criteria for osteoarthritis according to the diagnostic standards by American College of Rheumatology or the clinical and radiological diagnostic standards. Osteoarthritis induced by traumatic, rheumatic or infectious diseases was excluded. The informed consent was obtained from all subjects. After cell isolation and culture, chondrocytes were stimulated with different concentrations (0, 1, 10, 100 μg/L, 0 as control) IL-1β for 24, 48, and 72 hours, separately and treated with aminoguanidine (AG), a kind of NOS inhibitor, for 72 hours. Nitric oxide (NO) was detected using NO kit to identify the activity of NOS inhibitor. Cell proliferation was examined by MTT array, and MMP-1, MMP-3, and MMP-9 production in supernatants were measured by technique of flexible Multi-Analyte Profiling (xMAP).
RESULTS: ①At different time points, there were significant differences in absorbance values between IL-1β groups (1, 10, 100 μg/L) and control group (P < 0.05, P < 0.01); the absorbance values of the same concentration of IL-1β were significantly different at 24 and 72 hours of stimulation (P < 0.01). ②The absorbance values of chondrocytes treated with IL-1β and AG for 72 hours were statistically significant compared with cells only stimulated with IL-1β (P < 0.01). ③IL-1β promoted NO expression in a dose-dependent manner. ④ IL-1βsignificantly stimulated chondrocytes to secret MMP-1, and MMP-3 compared with control group ( P < 0.01), but MMP-9 was not detected in this study.
CONCLUSION: IL-1β could reduce chondrocyte proliferation and induce MMP secretion, but these effects are blocked by AG. IL-1β and AG influence chondrocytes by NO.

Liang PZ, Jiang JM, Liu CF, Sun W, Yu L, Qiu XZ. Effects of nitricoxide synthase inhibitor on interleukin-1 beta-induced chondrocyte proliferation and matrix metalloproteinase expression.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2008;12(15):2820-2824(China) [www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-15/15k-2820(ps).pdf]

骨关节炎（Osteoarthritis，OA）的病理发展过程涉及数以百计的分子，这些分子可分为促炎因子和抗炎因子，正是促炎因子和抗炎因子之间失衡，导致胞外胶原的降解和基质的破坏。软骨细胞是软骨组织中唯一的细胞，其分泌细胞因子的情况势必影响自身和胞外基质的转归。其中，白细胞介素1β在骨关节炎中发挥广泛的生物学作用，可促进一氧化氮的表达。研究表明，白细胞介素1β对鼠肾细胞[1]、心肌细胞[2]和神经上皮细胞[3]发挥抗增殖作用，那么白细胞介素1β是否可抑制人的软骨细胞增殖？这种抗增殖作用是否可被一氧化氮合酶抑制剂抑制？所以，本实验旨在观察白细胞介素1β对人软骨细胞的增殖作用和对软骨细胞表达基质金属蛋白酶的影响，以及一氧化氮合酶抑制剂在该过程中的作用，从而进一步明确一氧化氮在骨关节炎病理发展过程中的作用，为具有抑制一氧化氮表达性质药物的临床应用提供依据。

设计：完全随机分组设计。
单位：南方医科大学附属南方医院脊柱骨病科，深圳市第二人民医院脊柱外科。
对象：选择2006-05/12在南方医科大学附属南方医院脊柱骨病科住院的膝骨关节炎患者8例，男3例，女5例，平均年龄63岁。所有患者均符合1986年美国风湿病学会关于骨关节炎的临床诊断标准或临床及放射学诊断标准，排除其他疾病（创伤性、风湿性及感染性）所导致的骨关节炎。所有患者均在术前告知，并签有试验知情同意书。
主要试剂及仪器：Ⅱ型胶原酶、胰蛋白酶(Gibco)；胎牛血清(PPA)；高糖DMEM、D-Hank’s 液、氨基胍、四甲基偶氮唑盐、二甲基亚砜(Sigma)。CO2培养箱（Revco）；一氧化氮、一氧化氮合酶检测试剂盒(南京建成)；酶联仪、免疫荧光显微镜、倒置显微镜(Olympus)；S-100免疫试剂盒、低温高速离心机(Sigma)。
设计、实施、评估者：实验设计为第一、二作者，干预实施为第一、三、六作者，评估为第一、四、五作者。参加人员均受过专业培训。
方法：
细胞培养[4]：取膝骨关节炎患者关节软骨细胞进行分离培养，无菌条件下削取关节头表面软骨组织，无钙、镁离子的D-Hank’s液漂洗3次，剪碎软骨组织至1 mm×1 mm×1 mm 大小，低速离心，弃上清，收集下层组织块，加5~10倍体积2.5 g/L 胰酶，置入37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中，消化20 min。体积分数为0.1的血清培养基终止胰酶消化后，1 000 r/min 离心10 min，去除上清，加入5~10倍体积25 g/L Ⅱ型胶原酶，置入37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中，消化4 h，充分吹打，200目滤网过滤后，再次1 000 r/min 离心10 min，去除上清，加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养基，计数后，接种至25 cm2 的培养瓶中，置入37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养，48 h 后可见细胞贴壁，每3天换液1次。软骨细胞铺满瓶底80%，即可用胰酶消化传代。随后的实验使用传
至第3代的软骨细胞。通过标记软骨细胞特异性S-100蛋白区别于其他细胞。
白细胞介素1β对软骨细胞增殖的影响：软骨细胞的增殖通过四甲基偶氮唑盐法测定。将软骨细胞计数后，以2.5×104个/孔的密度接种至96孔板上，每孔加入200 μL 含体积分数为0.1血清的DMEM培养液，培养24 h，然后换用含不同浓度（0，1，10，100 μg/L， 0 μg/L作为对照）白细胞介素1β的5 g/L DMEM培养液继续培养。24，48，72 h 后检测时每孔加四甲基偶氮唑盐（2 g/L）20 μL，继续培养4 h，吸出孔内培养液后，加入二甲基亚砜200 μL/孔，室温下，将平板置于微孔振荡器上振荡10 min 后，分光光度计在570 nm 处检测吸光度（A）值。
一氧化氮合酶抑制剂氨基胍对软骨细胞增殖的影响：将软骨细胞计数后，以2.5×104个/孔的密度将细胞接种至96孔板上，每孔加入200 μL 含体积分数为0.1血清的DMEM培养液，培养24 h，然后换用含不同浓度(0，1，10，100 μg/L，0 μg/L 作为对照)白细胞介素1β和氨基胍（终浓度为100 μmol/L）的5 g/L DMEM培养液培养72 h。检测时每孔加四甲基偶氮唑盐（2 g/L）20 μL，继续培养4 h，吸出孔内培养液后，加入二甲基亚砜200 μL/孔，室温下，将平板置于微孔振荡器上振荡10 min 后，分光光度计在570 nm 处检测吸光度（A）值。
一氧化氮表达的检测：在上述实验过程中，收集在加入氨基胍作用72 h 前后各组的细胞培养上清液，其中一部分储存于-80 ℃ 的冰箱内，用于随后基质金属蛋白酶的检测，另一部分用于一氧化氮表达的检测。一氧化氮半衰期短而其终末代谢产物硝酸盐和亚硝酸盐稳定，可间接反应一氧化氮的释放量。依据试剂盒说明操作。酶联仪У=550 nm，分别测各样品吸光度（A）值。新鲜的培养基作为对照。
基质金属蛋白酶表达的检测：将上述储存于-80 ℃ 冰箱内的细胞上清液室温下解冻后，检测基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的表达量。基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9表达量的检测利用高通量、高敏感性的蛋白芯片技术进行。由于在上述检测中发现，100 μg/L 白细胞介素１β无论是对软骨细胞一氧化氮的分泌还是对软骨细胞增殖的影响都是最大，所以本实验仅检测该浓度下对软骨细胞基质金属蛋白酶的表达。
主要观察指标：①白细胞介素1β对软骨细胞增殖的影响。②氨基胍对软骨细胞增殖的影响。③一氧化氮和基质金属蛋白酶表达的检测。
统计学分析：由第一作者采用SPSS 13.0软件包完成统计处理，实验数据以_x±s表示，组间比较采用方差分析。P < 0.05为差异有显著性意义。

不同时间点1，10，100 μg/L 白细胞介素1β组的吸光度值与对照组相比，差异显著（P < 0.05，P < 0.01）；相同浓度白细胞介素1β在24，72 h 的吸光度值相比较，差异显著(P < 0.01)。说明白细胞介素1β对软骨细胞增殖的影响呈现浓度依赖和时间的负向关系，在该浓度和时间段中，浓度为100 μg/L 的白细胞介素1β作用72 h 可达到其最大的抑制作用
2.2 氨基胍对软骨细胞增殖的影响见表2。

白细胞介素1β和氨基胍(100 μmol/L)共同作用软骨细胞72 h 后，各浓度组吸光度与白细胞介素1β组相比，差异显著（P < 0.01），说明白细胞介素1β对软骨细胞的增殖抑制作用可被氨基胍逆转。
2.3 白细胞介素1β和氨基胍对软骨细胞一氧化氮表达的影响见表3。
白细胞介素1β可促进软骨细胞一氧化氮的表达，并呈剂量依赖关系，与对照组相比，差异具有显著性意义（P < 0.01）。加入氨基胍作用前后相比差异显著（P < 0.01），说明白细胞介素1β诱导软骨细胞表达一氧化氮的作用可被氨基胍抑制。
2.4 白细胞介素1β和氨基胍对软骨细胞基质金属蛋白酶的影响见表4。
与对照组相比，白细胞介素1β可促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达（P < 0.01），并且这种作用可被氨基胍抑制（P < 0.01），而白细胞介素1β和/或氨基胍对基质金属蛋白酶9表达的影响与对照组相比差异无显著性（P > 0.05）。

研究显示，白细胞介素1β在骨关节炎的病理发展过程中发挥着广泛的生物学作用，如促进一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶的表达，破坏抗炎因子和促炎因子之间的平衡，促进促炎因子的表达等[5]。另外，白细胞介素1β可抑制软骨细胞的增殖，促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达。从本实验的结果来看，不同剂量的白细胞介素1β在不同时间点作用于软骨细胞后，所测得的吸光度值随白细胞介素β剂量的增高而变小，随时间的延长而变小，呈现浓度时间依赖性，发挥抗增殖作用。并且浓度为100 μg/L 的白细胞介素1β作用72 h 可发挥其最大的抗增殖作用。作为诱导型一氧化氮合酶抑制剂之一的氨基胍可以抑制一氧化氮的表达，与白细胞介素1β共同作用于软骨细胞后，所测得的吸光度值较之单独白细胞介素1β作用后所测得的吸光度值明显增高，说明氨基胍可以逆转白细胞介素1β对软骨细胞的抗增殖作用。从基质金属蛋白酶的表达情况来看，氨基胍可以抑制白细胞介素1β诱导软骨细胞基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达。从白细胞介素1β和氨基胍作用软骨细胞后一氧化氮的表达情况来看，氨基胍可以抑制白细胞介素1β诱导软骨细胞一氧化氮的表达。由此，可以认为白细胞介素1β对软骨细胞的抗增殖作用是通过一氧化氮途径发挥作用的。
最近，有关研究表明，诱导型一氧化氮合酶抑制剂可抑制鼠肾细胞[1]、心肌细胞[2]和神经上皮细胞[3]的增殖，并且有作者[2]称抗增殖作用是通过NO-cGMP途径发挥作用的。一氧化氮一旦在外界作用下形成后，可结合和激活s-GC，通过c-GMP途径影响基因转录、翻译及翻译后加工等，抑制DNA的合成。Manacu等[6]发现一氧化氮也可通过多种非c-GMP依赖性途径影响下游分子的活性。在本实验中，通过分析所测得的数据，也认为白细胞介素1β对软骨细胞的抗增殖作用是通过一氧化氮途径发挥作用的。
过量的一氧化氮可促进基质金属蛋白酶中某些酶的表达，增加基质中胶原裂解，从而导致软骨的破坏。炎症关节局部高浓度细胞因子（如白细胞介素1β）可以刺激一氧化氮产生，高浓度一氧化氮一方面抑制软骨细胞增殖，使软骨细胞修复能力低下[7]；另一方面一氧化氮还促进软骨细胞糖酵解，产生ATP，使胞外基质合成减少，无法承载正常的负荷，从而加速软骨破坏[8]。并且研究显示高浓度的一氧化氮可加速软骨细胞自身的凋亡[9-10]。还有研究称一氧化氮可直接抑制软骨细胞合成软骨基质[11]。
本实验选取浓度为100 μg/L 的白细胞介素1β作用72 h 作为检测组。结果表明白细胞介素1β可促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达，氨基胍可抑制白细胞介素1β对软骨细胞基质金属蛋白酶１和基质金属蛋白酶3的诱导作用。基质金属蛋白酶1属于胶原酶的亚类，有很多组织表达基质金属蛋白酶1，而在正常的软骨中很难发现，这可能是浓度低或者与组织金属蛋白酶结合的原因[12]。但在炎性刺激下软骨中则有明显升高，基质金属蛋白酶1可以降解Ⅰ、Ⅲ胶原的能力明显强于对Ⅱ型胶原的作用，其主要是降解胶原纤维的螺旋区[13]。正常关节内仅存在少量的维持骨生理性改建的基质金属蛋白酶3，炎症条件下，白细胞介素1β刺激软骨细胞释放基质金属蛋白酶3，使关节组织基质及关节液中基质金属蛋白酶3的含量增加[14]，基质金属蛋白酶3直接分解基质中多种胶原的N、C端多肽，导致软骨崩解，基质金属蛋白酶3还能激活其他基质金属蛋白酶，加剧关节软骨和关节盘基质的损害[6]。有报告显示[15]，白细胞介素1β主要是通过诱导兔关节软骨细胞合成一氧化氮促使基质金属蛋白酶14、基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶3合成，或通过上调软骨细胞整合素受体信号传递介导基质金属蛋白酶产生，并且已经证实了白细胞介素1β也可通过一氧化氮促使人软骨细胞基质金属蛋白酶3的合成，但是白细胞介素1β与人的软骨细胞整合素受体信号之间的关系还有待进一步研究。另外该实验中，即使在白细胞介素1β作用下，基质金属蛋白酶9的生成也无明显的变化，这和所报道的内容相符。有作者[16-18]指出基质金属蛋白酶在软骨中的分布具有层次性，基质金属蛋白酶9主要位于软骨的深层，所以导致这种情况的原因可能与在取标本时为避免累及软骨下骨只是从其表面刮取而未涉及深层软骨有关。
本实验应用液态芯片技术检测基质金属蛋白酶的表达情况。液态芯片是一种全新概念的生物芯片。该技术的核心是把微小的聚苯乙烯小球（5.6 μm）用荧光染色的方法进行编码（微球的颜色是通过两种荧光染料染色得到的，调节两种荧光染料的比例可以获得100种不同颜色的微球），然后将每种颜色的微球（或称为荧光编码微球）共价交联上针对特定检测物的探针、抗原或抗体。最后用LuminexTM100进行分析，仪器通过两束激光分别识别编码微球和检测微球上报告分子的荧光强度。因为分子杂交或免疫反应是在悬浮溶液中进行，检测速度极快，而且可以在一个微量液态反应体系中同时检测多达100个指标[19-20]。该技术是ELASE技术的升级，可以定性定量分析检测物。
总之，白细胞介素1β对软骨细胞的抗增殖作用及促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达，两者协同破坏软骨基质，诱导型一氧化氮合酶抑制剂可以逆转白细胞介素1β对软骨细胞的破坏作用，从而保护软骨。随着对一氧化氮发挥作用途径的进一步研究，可以为治疗骨关节炎临床药物研发和应用提供依据。

1 Blume C,Sabuda-widemann D,Pfeilschifter J,et al. Cerivastatin inhibits proliferation of interleukin-1 beta-induced rat mesangial cells by enhanced formation of nitric oxide. Eur J Pharmacol 2004;485(1-3): 1-10
2 Wang S,Wang X,Yan J,et al. Resveratrol inhibits proliferation of cultured rat cardiac fibroblasts: correlated with NO-cGMP signaling pathway. Eur J Pharmacol 2007;567(1-2):26-35
3 de la Mano A,Gato A,Alonso MI,et al. Role of interleukin-1beta in the control of neuroepithelial proliferation and differentiation of the spinal cord during development. Cytokine 2007;37(2):128-137
4 Hu DN,Yang PY,Ku MC,et al. Isolation and cultivation of human articular chondrocytes. Kaohsiung J Med Sci 2002;18(3):113-120
5 Abramson SB,Yazici Y. Biologics in development for rheumatoid arthritis: relevance to osteoarthritis. Adv Drug Deliv Rev 2006;58(2): 212-225
6 Manacu CA,Martel-Pelletier J,Roy-Beaudry M,et al. Endothelin-1 in osteoarthritic chondrocytes triggers nitric oxide production and upregulates collagenase production. Arthritis Res Ther 2005; 7(2):R324-R332
7 Li MR,Wang MM. Anhui Yiyao 2005;9 (2):108-110
李美荣,王美美.骨关节炎患者血清和关节液一氧化氮及其合成酶变化的意义[J].安徽医药,2005,9 (2):108-110
8 Wang Y,Xing GS,Yu SL,et al. Zhonghua Fengshibingxue Zazhi 2003;7 (12):718-721
王毅,邢国胜,于顺禄,等.IL-1β诱导软骨细胞培养金属蛋白酶/金属蛋白酶抑制剂水平及药物对其影响[J].中华风湿病学杂志,2003,7 (12):718-721
9 Vuolteenaho K, Moilanen T,Jalonen U,et al. TGFbeta inhibits IL-1 -induced iNOS expression and NO production in immortalized chondrocytes. Inflamm Res 2005;54(10):420-427
10 Lopez-Armada MJ,Carames B,Lires-Deán M,et al. Cytokines, tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1beta, differentially regulate apoptosis in osteoarthritis cultured human chondrocytes. Osteoarthritis Cartilage 2006;14(7):660-669
11 bota T,Kubota E,Matsumoto A,et al. Identification of matrix metalloproteinases (MMPs) in synovial fluid from patients with temporomandibular disorder. Eur J Oral Sci 1998;106(6):992-998
12 Montrull HL,Brizuela NY,Demurtas SL,et al. Structure and secretory activity of cultured chondrocytes from patients with osteoarthritis. Biocell 2005;29(2):163-167
13 acRae VE,Farquharson C,Ahmed SF. The restricted potential for recovery of growth plate chondrogenesis and longitudinal bone growth following exposure to pro-inflammatory cytokines. J Endocrinol 2006;189(2):319-328
14 Aida Y,Maeno M,Suzuki N,et al. The effect of IL-1beta on the expression of matrix metalloproteinases and tissue inhibitors of matrix metalloproteinases in human chondrocytes. Life Sci 2005;77(25):3210-3221
15 Tan ZL,Xing GS,Li DD,et al. Gu Yu Guanjie Sunshang Zazhi 2003;18 (5):316-340
谈志龙,邢国胜,李德达,等.细胞因子对关节软骨细胞作用的研究[J].骨与关节损伤杂志,2003,18 (5):316-340
16 Tetlow LC,Adlam DJ,Woolley DE. Matrix metalloproteinase and proinflammatory cytokine production by chondrocytes of human osteoarthritic cartilage: associations with degenerative changes. Arthritis Rheum 2001;44(3):585-594
17 Tetlow LC,Adlam DJ,Woolley DE. Matrix metalloproteinase and proinflammatory cytokine production by chondrocytes of human osteoarthritic cartilage: associations with degenerative changes. Arthritis Rheum 2001;44(3):585-594
18 Freemont AJ,Hampson V,Tilman R,et al. Gene expression of matrix metalloproteinases 1,3,and 9 by chondrocytes in osteoarthritic human knee articular cartilage is zone and grade specific. Ann Rheum Dis 1997;56(9):542-549
19 Olsson A,Vanderstichele H,Andreasen N,et al. Simultaneous measurement of beta-amyloid(1-42),total tau,and phosphorylated tau (Thr181) in cerebrospinal fluid by the xMAP technology. Clin Chem 2005;51(2):336-345
20 Skogstrand K,Thorsen P,Norgaard-Pedersen B,et al. Simultaneous measurement of 25 inflammatory markers and neurotrophins in neonatal dried blood spots by immunoassay with xMAP technology. Clin Chem 2005;51(10):1854-1866