课题背景：课题为国家自然科学基金资助项目（30400609）；上海市重点学科建设资助项目（T0302）。肠纤维化主要因肠间质细胞过度增殖及细胞外基质的异常沉积所致，转化生长因子β在此过程中起关键作用，结缔组织生长因子是转化生长因子β致纤维化作用的特异性下游介质，转化生长因子β的促肠纤维化作用可通过多种信号途径诱导结缔组织生长因子的表达来完成。本课题组前期实验显示针灸对肠纤维化具有一定防治作用。

临床应用性：实验从转化生长因子β1、结缔组织生长因子角度探讨隔药灸和电针改善克罗恩病肠壁纤维化的作用机制，结果表明隔药灸和电针可能通过抑制转化生长因子β1和结缔组织生长因子的表达，进而减少细胞外基质（Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白）的生成，从而促使结肠组织结构与功能改善，达到治疗肠壁纤维化之目的。

相关链接：结缔组织生长因子是近年来备受重视的促组织纤维化细胞因子，不仅具有直接促纤维化作用如促进间质细胞过度增殖和细胞外基质合成增加，还能作为转化生长因子β的下游蛋白而特异地介导转化生长因子β的促纤维化效应。转化生长因子β靶细胞种类繁多，生物效应复杂，如阻断转化生长因子β表达可能导致其生理功能抑制。结缔组织生长因子生物效应较单一，阻断其表达或抑制其活性，可能是一种更特异更有效的防治肠纤维化的新靶点、新方法。

上海市针灸经络研究所，上海市 200030

马晓芃☆，女，1973年生，山东省德州市人，汉族，2001年上海中医药大学毕业，博士，副研究员，主要从事针灸治疗消化系统疾病的临床与基础研究。
pengpengma@
163.com

国家自然科学基金资助项目(30400609)*；上海市重点学科建设资助项目（T0302）*

摘要
背景：肠壁纤维化是克罗恩病的常见表现。转化生长因子β1是炎症性肠病中控制胶原合成和介导肠纤维化复杂调节机制中的重要生长因子，结缔组织生长因子是转化生长因子β特异性下游效应分子。
目的：实验拟观察隔药灸与电针对克罗恩病大鼠结肠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白表达的影响。
设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-07/12在上海中医药大学实验动物中心和国家中医药管理局针灸免疫三级实验室、临床免疫三级实验室完成。
材料：健康雄性SD大鼠60只，48只用于制备大鼠克罗恩病模型；三硝基苯磺酸由Sigma公司提供。
方法：60只大鼠随机数字表法分为5组，模型组：不作任何治疗，作与隔药灸组相同的固定。隔药灸组：取天枢(双)、气海穴，每次每穴灸2壮，每日隔药饼灸1次，连续10 d。电针组：取天枢(双)、气海穴，采用LD202H型韩氏神经穴位刺激仪电针刺激，频率2/50 Hz，20 min/次，1次/d，连续10 d。药物组：美沙拉嗪灌胃治疗，2次/d，连续10 d。正常组：无任何干预措施，作与隔药灸组相同的固定。
主要观察指标：苏木精-伊红染色后光镜下观察结肠病理组织学变化；免疫组织化学方法检测结肠转化生长因子β1、结缔组织生长因子、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白的表达；实时荧光定量聚合酶链反应检测结缔组织生长因子mRNA的表达。
结果：纳入SD大鼠60只，每组各取1只用于模型鉴定。模型组4只大鼠死亡，7只进入结果分析；其他4组随机取8只进入结果分析。①苏木精-伊红染色正常组可见正常结肠壁组织，黏膜完好；模型组溃疡形成，黏膜下层可见大量纤维组织增生而明显增宽，肉芽组织增生。隔药灸组、电针组和药物组病理组织学均较模型组改善。②与正常组比较，模型组大鼠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达以及结肠结缔组织生长因子mRNA表达均升高（P < 0.01）。经治疗后，隔药灸组、电针组大鼠结肠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达均降低（P < 0.05或P < 0.01），但结缔组织生长因子mRNA 变化不显著(P 均 > 0.05)；隔药灸组对结缔组织生长因子蛋白的下调作用较电针组更显著（P < 0.01）；药物组Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1蛋白表达也显著降低（P < 0.05或P < 0.01），但结缔组织生长因子蛋白及mRNA 变化不显著 (P 均 > 0.05) 。
结论：隔药灸和电针治疗能够下调克罗恩病大鼠结肠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、转化生长因子β1、结缔组织生长因子蛋白表达，隔药灸对结缔组织生长因子蛋白的调节作用优于电针。
关键词：克罗恩病；结缔组织生长因子；转化生长因子β1；Ⅰ型胶原；纤维连接蛋白

马晓芃，安彩萍，吴焕淦，刘慧荣，施征，杨玲，杨珊. 隔药灸与电针对克罗恩病大鼠结肠转化生长因子β1和结缔组织生长因子及Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响[J].中国组织工程研究与临床康复，2008，12(20):3853-3858
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-20/20k-3853(ps).pdf]

中图分类号:R329.114
文献标识码:B
文章编号:1673-8225
(2008)20-03853-06

收稿日期：2008-02-15 修回日期：2008-04-15
(54200802150009/ WL·Q)

Herbs-partitioned moxibustion and electro-acupuncture effects on transforming growth factor-beta 1, connective tissue growth factor, collagen type Ⅰ and fibronectin expression in the colon of Crohn’ s disease rats

Abstract

BACKGROUND:Fibrosis of intestine wall is common in Crohn’ s disease. Transforming growth factor-beta 1 (TGF-β1) is an important growth factor to control the collagen synthesis and mediate the intestine fibrosis in the complicated regulatory mechanism of inflammatory bowel disease. Connective tissue growth factor (CTGF) is a specific lower effector molecule of TGF-β1.
OBJECTIVE: To explore the effects of electro-acupuncture and herbs-partitioned moxibustion on expression of TGF-β1, CTGF, collagen type Ⅰ and fibronectin in Crohn's disease rats.
DESIGN, TIME AND SETTING: The randomized control animal experiment was performed at the Animal Laboratory Center of Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, the Third Class Acupuncture & Moxibustion Immune Laboratory and the Third Class Clinical Immune Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine from July to December 2007.
MATERIALS: Of 60 healthy male SD rats, 48 rats were used to prepare for Crohn's disease model. Trinitro-benzene-sulfonic acid was purchased from Sigma, USA.
METHODS: A total of 60 rats were randomly divided into 5 groups. When the Crohn's disease models were created, rats in the model group were fixed the same as the herbs-partitioned moxibustion group, but no other treatment. Rat models in the herbs-partitioned moxibustion group were treated once daily on Tianshu (ST 25) (bilateral) and Qihai (CV 6) two cones each point, for ten days continuously. Rats in the electro-acupuncture group were acupunctured at Tianshu (ST 25) (bilateral) and Qihai (CV 6) points were stimulated by Hanshi LD202H neuron-points stimulator, with 2/50 Hz frequency for 20 minutes，once daily and lasting for 10 days continuously. Rats in the medication group were given mesalazine by intragastric administration, twice a day for 10 days continuously. Rats in the normal group were intact, but the same fixation as the herbs-partitioned moxibustion group.
MAIN OUTCOME MEASURES: Pathologic histology changes in the colon were observed under a light microscope by Hematoxylin and Eosin Staining. TGF-β1, CTGF, collagen type Ⅰ and fibronectin expression were detected by immunohistochemical method and CTGF mRNA by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction in the colon.
RESULTS: One rat from each group was identified for model. Four rats died and 7 were analyzed in the model group. Eight from the rest 4 groups each were analyzed for the results. Hematoxylin and Eosin Staining shows a normal intestine wall and good mucosa in normal group; ulceration formed and a widen mucosa under layer with a large amounts of fibroplasia and hyperplasy of granulation tissue in model group. Pathologic histology was improved in the herbs-partitioned group, electro-acupuncture group and medication group compared with the model group. Compared with the normal group, the expression of collagen type Ⅰ, fibronectin, TGF-β1, CTGF protein and CTGF mRNA in the colon were significantly higher in the model group (P < 0.01). After treatment, the expression of collagen type Ⅰ, fibronectin, TGF-β1 and CTGF proteins decreased significantly in the herbs-partitioned moxibustion group and electro-acupuncture group (P < 0.05 or P < 0.01), whereas the expression of CTGF mRNA changed insignificantly (P > 0.05) The effect of down regulation of CTGF protein was much significant in the herbs-partitioned moxibustion group compared with the electro-acupuncture group (P < 0.01). The protein expression of collagen type Ⅰ, fibronectin and TGF-β1 decreased significantly in the medication group (P < 0.05 or P < 0.01), whereas the expression of CTGF protein and mRNA had no significant changes (P > 0.05).
CONCLUSION: Herbs-partitioned moxibustion and electro-acupuncture can down-regulate the expression of collagen type Ⅰ, fibronectin, TGF-β1 and CTGF protein in Crohn’ s disease rats. Herbs-partitioned moxibustion is better than electro-acupuncture in the regulation of CTGF protein.

Ma XP, An CP, Wu HG, Liu HR, Shi Z, Yang L, Yang S. Herbs-partitioned moxibustion and electro-acupuncture effects on transforming growth factor-beta 1, connective tissue growth factor, collagen type Ⅰ and fibronectin expression in the colon of Crohn’s disease rats.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2008;12(20):3853-3858(China)
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-20/20k-3853 (ps).pdf]

0 引言

研究发现，转化生长因子β(Transforming growth factor-β，TGF-β)在致组织和器官纤维化中起着重要作用，其致纤维化作用和调控机制已成为当前的研究热点。结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor，CTGF)是TGF-β特异性下游效应分子，其生物学效应相对单一，主要介导TGF-β的促细胞增殖和细胞外基质合成等作用。阻断CTGF表达或抑制其活性可能是一种更特异更有效的防治纤维化的手段[1-2]。本实验旨在探讨隔药灸和电针对克罗恩病(Crohn’s disease，CD)大鼠结肠TGF-β1、CTGF蛋白及CTGF mRNA 的调控作用，并观察结肠Ⅰ型胶原(Collagen Type Ⅰ)及纤维连接蛋白(Fibronectin, FN)表达的变化，以期为针灸治疗肠壁纤维化提供实验依据。

1 材料和方法

设计：随机对照动物实验。
时间及地点：实验于2007-07/12在上海中医药大学实验动物中心和国家中医药管理局针灸免疫三级实验室、临床免疫三级实验室完成。
材料：选择健康雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠60只，清洁级，体质量（200±20）g，由上海中医药大学实验动物中心提供(实验动物质量合格证：SCXK(沪)2003-0003)，自由摄食 与饮水。

模型制备：参照国际公认的Morris方法，应用TNBS制备大鼠克罗恩病模型[3-4]。大鼠造模前24 h 禁食、不禁水。大鼠称质量后，20 g/L 戊巴比妥钠20 mg/kg 腹腔注射麻醉。①TNBS灌肠溶液制备：将无水乙醇加双蒸水，配成50%的乙醇，然后将5%(W/V)的TNBS与50%的乙醇按2∶1比例混合成TNBS灌肠液。②灌肠：造模大鼠以TNBS溶液100 mg/kg 灌肠；正常组大鼠用相同体积的0.9%氯化钠注射液灌肠。灌肠器插入肛门约6~ 8 cm，注入灌肠液。大鼠体位为头朝下，拔出灌肠器后再倒立1 min 左右，以防灌肠液溢出。每隔10 d重复灌肠1次，共4次。造模结束后，分别取正常组大鼠1只，造模大鼠4只，解剖并剪取结肠组织，作苏木精-伊红染色及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原染色，在确认模型制备成功的基础上各组进行相应干预。
干预分组：60只大鼠随机数字表法分为正常组、模型组、隔药灸组、电针组和药物组，每组12只。造模结束后，模型组：不作任何治疗，作与隔药灸组相同的固定。隔药灸组：取天枢(双)、气海穴。穴位定位参照李忠仁等主编的《实验针灸学》中有关标准确定。采用隔药饼灸，药饼配方为附子、肉桂等药，研成细粉，灸前用黄酒调和药粉拌成糊状，制成直径0.5 cm、厚0.3 cm 大小的药饼。艾炷选精制艾绒约90 mg，制成小椎体状。每次每穴灸2壮，每日隔药饼灸1次，连续10 d。电针组：取天枢(双)、气海穴。穴位定位同隔药灸组。针刺深度0.3~0.4 cm，电针刺激采用LD202H型韩氏神经穴位刺激仪，疏密波，频率2/50 Hz，20 min/次，1次/d，连续10 d。药物组：采用美沙拉嗪灌胃治疗。配制成美沙拉嗪灌胃液，每日投药量按成人（70 kg 体质量，4 g/d）与大鼠（200 g 体质量）56∶1比例，2次/d，连续10 d。正常组：无任何干预措施，作与隔药灸组相同的固定。
治疗结束后第2天，麻醉并处死各组大鼠。部分结肠组织用体积分数为0.1的中性甲醛溶液固定进行病理组织学观察及免疫组织化学指标检测，部分结肠组织放入液氮，后转至-80 ℃ 冰箱冻存，用于实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)检测。
指标检测：
病理组织学观察：苏木精-伊红染色，光镜下观察。
结肠Ⅰ型胶原、FN、TGF-β1和CTGF蛋白表达的检测：采用免疫组织化学Envision法检测，并进行图像分析。主要操作步骤：①石蜡切片常规脱蜡至水，PBS洗3×3 min。②用pH 6.0 0.01 mol/L 柠檬酸缓冲液热诱导修复(微波3档20 min)，室温自然冷却，PBS洗3× 3 min。③0.3%H2O2抑制内源性过氧化物酶20 min，室温；PBS洗3×3 min。④20%正常羊血清室温孵育 30 min，不洗。⑤滴加适当稀释一抗，37 ℃ 孵育 2 h；PBS洗3×3 min。⑥Envision试剂(HRP-M) 37 ℃， 30 min；PBS洗3×3 min。⑦DAB显色，苏木精衬染，热水蓝化；吹干后，树脂封固；镜下观察，并照像记录。免疫组织化学阳性产物呈棕黄色或棕褐色，核呈紫蓝色。⑧图像分析采用Motic图像分析系统，每张切片随机选取3个视野检测平均吸光度，取均值进行统计学分析。
CTGF mRNA表达的检测：采用实时荧光定量聚合酶链反应检测。
引物、荧光探针的合成与纯化：CTGF上游引物序列为5’-AAA TGG CTT GCT CAG GGT AAC T-3’，CTGF下游引物序列为5’-GTA ACT TTT GGT CAC ACT CTC AAC A-3’；CTGF探针序列为5’-FAM-CCT CCC AAA CCA GTC ATA GTC AAA GAA GCA GC-TAMRA-3’；扩增片段长度为143 bp。GAPDH上游引物序列为5’-CCG AGG GCC CAC TAA AGG-3’，GAPDH下游引物序列为5’-GCT GTT GAA GTC ACA GGA GAC AA-3’；GAPDH探针序列为5’-FAM-CAT CCT GGG CTA CAC TGA GGA CCA-TAMRA-3’；扩增片段长度为120 bp。引物、荧光探针的合成与纯化均由达安生物技术有限公司提供。
①组织总RNA的抽提，按试剂盒说明书操作。②反转录cDNA：将试剂盒复融，5×反转录buffer，dNTPs，MMLV，上游引物F，下游引物R，10 000 r/min 离心数秒。将经过稀释后的RNA样本进行反转录，反应体系如下：5×反转录buffer 4 μL，上游引物F 0.4 μL，下游引物R0.4 μL，dNTPs 0.2 μL，反转录酶MMLV 1 μL，DEPC处理水10 μL，RNA模板4 μL，总体积为20 μL。反应条件为37 ℃，1 h，95 ℃，5 min。③FQ-PCR反应：将制备好的cDNA进行PCR扩增，扩增体系如下：5×PCR buffer 10 μL，上游引物F 0.5 μL，下游引物R 0.5 μL，dNTPs 0.5 μL，Taq man探针0.5 μL，Taq酶1 μL，ddH2O水32 μL，cDNA模板5 μL，总体积为50 μL。扩增条件：50 ℃ 2 min；95 ℃ 10min；95 ℃ 15 s；60 ℃ 1 min；40个循环。④FQ-PCR结果的计算：反应在ABI7300型荧光定量PCR仪上进行，数据采用仪器自带软件（ABI Prism 7300 SDS Software）分析。CTGF mRNA的相对表达量以2-△Ct×100%表示（△ct=目的基因ct值－内参基因ct值）。
主要观察指标：①结肠病理组织学观察。②结肠Ⅰ型胶原、FN、TGF-β1和CTGF蛋白表达。③结肠CTGF mRNA表达。
设计、实施、评估者：实验设计为第一作者，干预实施为第一、二、六作者，评估为全部作者。参加实验者均经过正规培训。
统计学分析：由第一、二作者采用SPSS 11.5软件包完成统计处理，正态分布的计量资料数据以_x±s表示，组间比较采用单因素方差分析；非正态分布的计量资料数据用中位数（四分位数间距）[M(QR)]表示，采用秩和检验。P < 0.05为差异有显著性意义。

2 结果

2.1 实验动物数量分析 纳入SD大鼠60只，每组各取1只用于模型鉴定。模型组4只大鼠死亡，7只进入结果分析；其他4组随机取8只进入结果分析。
2.2 病理组织学观察结果

光镜下观察各组结肠病理组织学变化

正常组:
正常结肠壁组织，黏膜完好

模型组:
肠道炎症明显，黏膜表面溃疡形成，黏膜下层充血、水肿、大量炎细胞浸润，黏膜下层可见大量纤维组织增生而明显增宽，可见增生的肉芽组织，动脉壁增厚，偶见裂隙样溃疡、肉芽肿，提示大鼠克罗恩病发生，模型制备成功

隔药灸组:
愈合性溃疡，轻度充血水肿、少量炎细胞浸润，黏膜下层少量纤维组织增生，明显轻于模型组

电针组:
愈合性溃疡形成，充血水肿，黏膜下层少量纤维组织增生，部分动物增生明显
药物组:
愈合性溃疡形成，充血水肿，黏膜下层可见少量纤维组织增生，炎性细胞浸润，与电针组类似

2.3 各组大鼠结肠Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的表达 见表1。

由表1可知，与正常大鼠相比，模型组大鼠结肠Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白免疫组织化学染色平均吸光度显著增高(P < 0.01)；经过隔药灸、电针、药物治疗后结肠Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白免疫组织化学染色平均吸光度均显著降低(P < 0.01)；其中隔药灸组、药物组Ⅰ型胶原的表达与正常组相比，差异均无显著性意义(P > 0.05)；隔药灸组、电针组纤维连接蛋白的表达与药物组相比，差异均有显著性意义(P < 0.01，P < 0.05)；提示CD大鼠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白表达显著提高，针灸、美沙拉嗪药物治疗均能降低异常增高的CD大鼠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白的表达；针灸对CD大鼠纤维连接蛋白的下调作用优于美沙拉嗪。
2.4 各组大鼠结肠TGF-β1和CTGF蛋白的表达 见表2。

由表2可知，模型组大鼠结肠TGF-β1蛋白表达显著增强，染色多呈强阳性(见图1a)，与正常组相比(见图1b)，差异有非常显著性意义(P < 0.01)；隔药灸组(见图1c)、电针组(见图1d)、药物组(见图1e)TGF-β1蛋白表达均显著降低，染色较浅，与模型组相比，差异均有显著性意义(P < 0.05或P < 0.01)；提示隔药灸、电针、美沙拉嗪治疗均能降低CD模型大鼠结肠TGF-β1蛋白的表达。模型组大鼠结肠CTGF蛋白表达增强，染色呈阳性或强阳性(见图2a)，与正常组相比(见图2b)，差异有非常显著性意义(P < 0.01)；隔药灸组(见图2c)、电针组(见图2d)CTGF蛋白表达均显著降低，染色较浅，与模型组相比，差异有显著性意义(P < 0.01)；药物组(见图2e)CTGF蛋白表达与模型组相比虽有降低趋势，但差异无显著性(P > 0.05)；电针组、药物组CTGF蛋白染色与隔药灸组相比，差异均有显著性意义(P < 0.01)，提示隔药灸、电针治疗均能降低CD模型大鼠结肠CTGF蛋白表达，其中隔药灸对CTGF蛋白表达的调节作用优于电针组和药物组。

2.5 各组大鼠结肠CTGF mRNA表达的检测 实验中设置的阴性对照扩增结果呈阴性表达，未检测到目的基因CTGF mRNA的表达。待测标本检测到目的基因CTGF mRNA的表达，结果显示，正常组[M(QR)]为0.020% (0.119%)，模型组为0.271% (2.369%)，隔药灸组为0.093%(0.685%)，电针组为0.238%(1.650%)，药物组为0.210% (1.385%)。经检验，模型组CTGF mRNA表达明显高于正常组(P < 0.05)，其他各组之间相比，差异均无显著性意义(P > 0.05)。

3 讨论

本课题组前期研究发现以天枢、气海为主穴的隔药灸疗法对轻、中度克罗恩病患者有一定疗效[5]。
肠纤维化可见于许多胃肠病病理过程。在肠管中，急慢性损伤均可有黏膜内间质细胞激活，转化为具有纤维原性表型的细胞，合成大量细胞外基质[6]。急性损伤一旦终止，肠管结构即恢复正常；而慢性损伤如克罗恩病有Th1细胞反应和透壁性炎症，纤维原性细胞不断增殖、扩增，可发生肠壁纤维化[7]。肠壁纤维化是克罗恩病的常见表现[6]，在克罗恩病患者中肠壁纤维化常导致狭窄形成和肠梗阻。肠纤维化中，过度表达的纤维原性胶原可能沉积在固有层、粘膜层、粘膜下层、肌层及浆膜层[8-9]。
TGF-β1是一种多功能的细胞活性调节因子，目前认为TGF-β1除调节机体免疫[10]、促进细胞生长发育外[11]，在绝大多数纤维化疾病中发挥着关键性的作用[12-15]，是炎症性肠病中控制胶原合成和介导肠纤维化复杂调节机制中的重要生长因子[16]。研究表明，TGF-β1在炎症性肠病特别是在克罗恩病中，与细胞外基质的变化、肠纤维化和狭窄的发生有关[17-18]。在克罗恩病的结肠黏膜中TGF-β1表达增加，通过刺激平滑肌细胞和成纤维细胞刺激组织胶原沉积，促成细胞外基质增加致成纤维化[19-21]。
CTGF是纤维化疾病发生过程中重要的促进胶原合成的生长因子，作为TGF-β1的下游效应介质，介导了TGF-β1的促细胞外基质积聚效应[22]。应用反义CTGF技术或抗CTGF中和抗体可以阻断TGF-β1引起的促纤维化效应[21]。在正常情况下CTGF表达水平较低，而且主要在间质细胞表达，其作用也限于结缔组织；CTGF的过度表达能促使Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白等细胞外基质的合成增多[23]。研究发现CTGF与肠纤维化的形成关系密切，可刺激成纤维细胞增殖和细胞外基质沉积。用TGF-β刺激正常和狭窄性克罗恩病的成纤维细胞，发现狭窄性克罗恩病的成纤维细胞TGF-β、CTGF蛋白和mRNA的表达均比正常组高[24-25]。TGF-β可通过多条信号途径，如Smads信号途径、ERK1/2MAPK及PKC等信号途径诱导CTGF的产生[26-29]。
本实验结果显示克罗恩病大鼠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白表达显著增加，结合病理组织学检测结果，提示结肠组织纤维化是克罗恩病大鼠的主要病理表现之一，与文献报道一致[6]。隔药灸、电针、美沙拉嗪治疗对结肠病理组织学变化均有一定的改善作用(以隔药灸组作用最为显著)，均能降低异常增高的克罗恩病大鼠Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白的表达，其中隔药灸、电针对纤维连接蛋白的下调作用优于美沙拉嗪。对大鼠结肠TGF-β1、CTGF蛋白及CTGF mRNA的检测发现，克罗恩病大鼠结肠TGF-β1、CTGF蛋白表达以及结肠CTGF mRNA表达均显著升高，经治疗后，隔药灸组、电针组大鼠结肠TGF-β1、CTGF蛋白表达均显著降低，但CTGF mRNA变化不显著，隔药灸组对CTGF蛋白的下调作用优于电针组；药物组Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、TGF-β1蛋白表达也显著降低，但CTGF蛋白及mRNA变化不显著。结果提示隔药灸和电针治疗对大鼠克罗恩病肠壁纤维化均具有一定的改善作用，其作用机制可能是通过抑制TGF-β1和CTGF的表达，进而减少细胞外基质(Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白)的生成，从而促使结肠组织结构与功能改善。

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