摘要
目的：骨形态发生蛋白2是目前研究最为广泛、诱导成骨活性最强的骨形态发生蛋白之一。实验拟构建绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(human Bone Morphogenetic Protein-2,hBMP2)真核表达载体，为在真核细胞的高效表达和基因治疗打下基础。
方法：实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室完成。①实验材料：含完整人骨形态发生蛋白2基因片段的pcDNA3.1/CT-hBMP2质粒由李曦铭博士惠赠；双顺反子真核表达载体 pSELECT-GFPzeo-MCS(Invivogen公司)，Zeo（Invivogen公司）；pTA2?-T Easy（鼎国生物技术有限公司）。②实验过程及评估：以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板，结合已设计好的特异性引物，采用聚合酶链反应方法亚克隆出人骨形态发生蛋白2目的片段，将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接，转化入感受态DH5α细胞中，通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的重组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2，并进行测序鉴定。
结果：①聚合酶链反应获得长度约1 216 bp的目的片段，与预期片段相符。②经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接，筛选及序列分析后，证实所插入目的片段与GenBank检索的骨形态发生蛋白2cDNA序列(NM-001200)100%匹配。
结论：成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2真核表达载体。
关键词：骨形态发生蛋白质类；基因表达；绿色荧光蛋白质类；组织构建

天津市天津医院脊柱外科，天津市 300211；2天津武警医学院病理学教研室，天津市200162

苗 军☆，男，1974年生，河北省沧州市人，汉族，2004年解放军总医院毕业，博士，主治医师，主要从事脊柱外科和生物材料的研究。
mj6688@163.com

国家自然科学基金资助
(30500516)*

中图分类号:R392.471
文献标识码:A
文章编号:1673-8225
(2008)24-04615-04

收稿日期：2007-10-20 　修回日期：2007-12-30
(07-50-10-5711/W?Q)