摘要
背景：已有实验证实，人热休克蛋白22(Heat shock protein22,HSP22)存在于人的多种组织中，但构建其真核表达质粒是否可转染人血管内皮细胞并完整表达。
目的：构建pEGFP-N1/HSP22真核表达质粒并观察在内皮细胞中的表达。
设计、时间及地点：单一样本观察，于2007-03/10在南昌大学第二附属医院分子中心完成。
材料：pEGFP-N1真核表达质粒及DH5α为南昌大学第二附属医院分子中心保存，MCF-7细胞来源于南昌大学生化实验室馈赠，人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）株购至南京基凯生物技术公司。
方法：采用反转录聚合酶链式反应从人MCF-7细胞中扩增热休克蛋白22基因,将热休克蛋白22基因连接到真核表达载体pEGFP-N1中，并转化DH5α，获得阳性克隆进行双酶切和测序鉴定。用脂质体法将重组质粒转染人脐静脉血管内皮细胞。
主要观察指标：荧光显微镜、反转录-聚合酶链反应法及Western blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达。
结果：①琼脂糖凝胶电泳检测聚合酶链反应扩增产物, 热休克蛋白22基因片段长约613 bp,与预期分子量相符，测序结果证实克隆完全正确；其阳性克隆进行酶切鉴定与热休克蛋白22理论值相符。②反转录-聚合酶链反应法检测转染的人脐静脉血管内皮细胞中有热休克蛋白22mRNA表达；Western blot检测可见一特异性热休克蛋白22蛋白条带存在。
结论：成功构建了携带人热休克蛋白22及pEGFP-N1真核表达质粒,并验证已在人脐静脉血管内皮细胞中表达。
关键词：热休克蛋白；克隆，生物；基因表达；转染；组织构建

南昌大学第二附属医院心内科，南昌大学心血管疾病研究所，江西省南昌市
330006

鲍慧慧☆，女，1977年生，江西省彭泽县人，汉族，南昌大学医学院在读博士，医师，主要从事心肌保护的研究。
huihui_bao@hotmail.com

通讯作者：程晓曙，博士研究生，教授，博士生导师，南昌大学第二附属医院心内科 南昌大学心血管疾病研究所; 江西省南昌市
330006 xiaoshumenfan@
126.com

江西省自然科学基金资助
(0640089)*

中图分类号:R329
文献标识码:A
文章编号:1673-8225
(2008)24-04633-04

收稿日期：2007-11-15 修回日期：2008-01-04 (07-50-11-6297/W?Q)