摘要
目的：基因重组腺病毒具有较高的转染率，且宿主范围广。实验拟构建携带人血管内皮细胞生长因子165基因的重组腺病毒载体（Ad.VEGF165），为后续基因转染、微囊化基因工程细胞及其动物模型研究提供实验基础。
方法：实验于2007-01/05在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所实验室完成（国家级重点实验室）。①实验材料：pAxCAwt.VEGF165由长海医院胸心外科研究所惠赠。②实验方法：采用脂质体转染法，将pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC共转染人胚肾293细胞，扩增后获得载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷型重组腺病毒。③实验评估：应用聚合酶链反应及酶切证实重组腺病毒中的目的基因。并根据50%组织培养感染剂量法计算病毒滴度。
结果：①重组腺病毒Ad.VEGF165的构建：采用脂质体法可使pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC有效转染人胚肾293细胞，扩增出载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷型重组腺病毒。②重组腺病毒Ad.VEGF165的鉴定：聚合酶链反应的产物进行NcoⅠ酶切鉴定，可得到597 bp、146 bp 2个片段，与GeneTool软件理论上计算的结果完全一致，计算病毒滴度为2.2×1015 pfu/L。
结论：采用pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC系统经脂质体转染法成功构建的复制缺陷的重组腺病毒Ad.VEGF165滴度高、毒性低、效率高、体外转染安全。
关键词：血管内皮细胞生长因子；腺病毒；粘粒；同源重组；基因治疗；组织构建

解放军第二军医大学长海医院整形外科，上海市 200433

韩焱福☆，男，1968年生，安徽省太湖县人，汉族，解放军第二军医大学在读博士，主治医师，主要从事组织移植及显微外科方面的研究。
dochyf@163.com

通讯作者：刘 军，硕士，主治医师，解放军第二军医大学长海医院整形外科，上海市 200433

上海市卫生局青年科研基金（2006Y41）*

中图分类号:R329.114
文献标识码:A
文章编号:1673-8225
(2008)24-04651-04

收稿日期：2007-11-03 修回日期：2008-02-19 (07-50-11-6031/WL?Y)