偏倚或不足：①实验所用细胞是健康的兔椎间盘细胞，是否退行性变或老化的椎间盘细胞也会对重组人成骨蛋白1产生类似反应尚需在椎间盘退行性变动物模型中进一步研究。②实验所培养的髓核和纤维环细胞取材于2月龄的实验动物，有局限性，尚不能说明是否不同年龄的动物的椎间盘细胞也会在重组人成骨蛋白1作用下发生相同或类似的改变。

临床应用性：组织工程学方法被认为是逆转或改善椎间盘退行性变的一种非常有前景的方法。本实验运用组织工程学方法，证实了体外培养于壳聚糖凝胶材料的兔纤维环和髓核细胞在重组人成骨蛋白1的刺激下可以合成更多的细胞外基质，从而有利于网络更多的椎间盘细胞，且凝胶材料更有利于植入体内。

重要的概念：可注射壳聚糖凝胶支架是组织工程材料的一种，在室温下是液态，可负载活性细胞和治疗药物，当注射到指定位置后，在体温、pH值、离子浓度或其他条件作用下，在注射位置发生相转变形成凝胶支架。

背景：成骨蛋白1有效刺激软骨细胞蛋白聚糖和胶原蛋白合成已被证实，椎间盘内注射成骨蛋白1可增加椎间盘高度也在动物模型中得到证实。
目的：体外评价重组人成骨蛋白1对培养于壳聚糖凝胶中的兔椎间盘细胞增殖和蛋白聚糖合成的作用。
设计、时间及地点：成组设计，实验于2007-08/2008-02在北京军区总医院骨科实验室完成。
材料：清洁级4月龄日本大耳兔5只。重组人成骨蛋白1为Sigma分装。医用级壳聚糖，脱乙酰度95.11%,黏度155 mPa?s, Mr 870 000,由北京纵横洋洲医药生物科技有限公司提供。
方法：无菌条件下取日本大耳兔椎间盘10个，分离其髓核和纤维环细胞并接种于自制壳聚糖凝胶支架，在培养液中加入重组人成骨蛋白1，并分为3组：对照组（无重组人成骨蛋白1）、100 μg/L重组人成骨蛋白1组、200 μg/L重组人成骨蛋白1组。
主要观察指标：培养7，14，21 d时对培养物DNA含量、蛋白聚糖合成量（35SO42-摄入量、硫酸盐黏多糖含量）进行检测。
结果：100，200 μg/L重组人成骨蛋白1组的DNA含量没有减少，对照组DNA含量逐渐下降。100，200 μg/L重组人成骨蛋白1组蛋白聚糖合成量明显高于对照组，200 μg/L重组人成骨蛋白1组升高更为显著。100，200 μg/L重组人成骨蛋白1组在3个时间点均呈现上升趋势，培养14 d和21 d的差异有显著性意义(P < 0.001)。
结论：重组人成骨蛋白1可有效促进体外培养的兔髓核和纤维环细胞增殖及蛋白聚糖合成。
关键词：髓核细胞；纤维环细胞；成骨蛋白1；壳聚糖；蛋白聚糖；生物材料

田海泉★，男，1980年生，山西省晋中市人，汉族，山西医科大学在读硕士，医师，研究方向椎间盘退行性变及椎间盘组织工程的研究。
tianhaiquan@126.com

通讯作者：李 放，教授，主任医师，硕士生导师，解放军北京军区总医院全军骨科研究所，北京市 100700 FANGL6722@ sina.com

中图分类号:R318
文献标识码:A
文章编号:1673-8225
(2008)27-05209-05

收稿日期：2008-04-10修回日期：2008-06-06
(54200804090002/Y Y)