Effects of chitosan solution plus hirudoid ointment on skin damage caused by docetaxel extravasation in rats
Zhu Qi-cong1, Luo Rong-cheng2, Ge Jun-feng1, Zhang Zheng-yi1, Xu Bin1

Abstract
BACKGROUND: Skin damages induced by drug extravasation are chiefly treated with cold compress and topical injection of dexamethasone. But the therapeutic effect is poor. Chitosan and hirudoid can promote the healing of skin damage.
OBJECTIVE: To explore the efficacy of chitosan solution combined with hirudoid ointment on skin damage caused by docetaxel extravasation in a rat model.
DESIGN, TIME AND SETTING: The experiment, a randomized control animal observation, was performed in the Experimental Animal Center of Nanfang Hospital, Southern Medical University (Guangzhou, Guangdong, China) from April 2006 to June 2007.
MATERIALS: Twenty-five SD rats of SPF grade were used in this study. Medical chitosan was produced by Shanghai Qisheng Biological Preparation Co., Ltd (China); Hirudoid was a product of Sankyo Pharmaceuticals Co., Ltd (Germany); Injectable docetaxel was purchased from Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd (China).
METHODS: Animal model with docetaxel extravasation was established in each abdomen of 25 SD rats, which were divided into five groups, namely chitosan group, hirudoid group, chitosan plus hirudoid group, saline group, and model control group. The injection site of docetaxel received external application of corresponding drugs, three times a day for totally 4 days. Model control group received no intervention.
MAIN OUTCOME MEASURES: The wound area on days 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25 and 29 were observed, and the time of healing was compared.
RESULTS: The wound area on days 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25 and 29 and the healing time were significantly lower in the chitosan group, hirudoid group and chitosan plus hirudoid group compared with saline group and control group (P < 0.05).
CONCLUSION: The monotherapy with chitosan or hirudoid is effective for skin damage caused by docetaxel extravasation. The efficacy of combined therapy seems no better than the monotherapy.

Zhu QC, Luo RC, Ge JF, Zhang ZY, Xu B.Effects of chitosan solution plus hirudoid ointment on skin damage caused by docetaxel extravasation in rats.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu 2008;12(27):5223-5225
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-27/27k-5223(ps).pdf]

摘要
背景：药物外渗致皮肤损伤多以冷敷、局部注射地塞米松治疗为主，疗效差。几丁糖、多磺酸黏多糖有促进皮肤损伤愈合的功能。
目的：观察几丁糖溶液复合多磺酸黏多糖软膏局部外涂对多西紫杉醇外渗性损伤大鼠的防治效果。
设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照观察，于2006-04/2007-06在南方医科大学南方医院动物实验中心完成。
材料：SPF级SD大鼠25只。医用几丁糖为上海其胜生物制剂有限公司产品，多磺酸黏多糖软膏为德国三共制药厂产品，注射用多西紫杉醇为江苏恒瑞医药股份有限公司产品。
方法：将25只大鼠双侧侧腹部制作多西紫杉醇血管外渗模型后按随机数字表法分为5组：几丁糖组、多磺酸黏多糖组、几丁糖+多磺酸黏多糖组、生理盐水组、模型对照组。各组药物局部外涂于多西紫杉醇注射部位，3次/d，共4 d；模型对照组不作任何防治干预。
主要观察指标：观察各组大鼠处理后1，5，9，13，17，21，25，29 d的损伤面积和损伤愈合时间。
结果：处理后1，5，9，13，17，21，25，29 d几丁糖组、多磺酸黏多糖组、几丁糖+多磺酸黏多糖组大鼠损伤面积均显著低于生理盐水组和模型对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)。几丁糖组、多磺酸黏多糖组、几丁糖+多磺酸黏多糖组的创面愈合时间显著低于生理盐水组、模型对照组，差异有显著性意义(P < 0.05)。
结论：单用几丁糖、多磺酸黏多糖软膏外涂对多西紫杉醇外渗性损伤具有一定疗效，联合用药未能提高疗效。
关键词：几丁糖；多磺酸黏多糖软膏；多西紫杉醇；诊断和治疗物质外渗；生物材料

朱其聪，罗荣城，戈君凤，张正义，徐斌.几丁糖溶液复合多磺酸黏多糖软膏对多西紫杉醇外渗性大鼠皮肤损伤的促愈效应[J].中国组织工程研究与临床康复，2008，12(27):5223-5225
[www.zglckf.com/zglckf/ejournal/upfiles/08-27/27k-5223(ps).pdf]

0 引言

抗肿瘤药外渗性皮肤损伤是临床化疗时常见的严重并发症之一，占抗肿瘤药副反应的0.6%~6%[1]，药物渗漏到皮下组织，轻者可引起局部红肿、疼痛，重者可损伤神经肌腱，甚至造成皮肤组织坏死导致肢体功能障碍。多西紫杉醇(Docetaxel)是一种新型抗肿瘤药物，以静脉给药为主要途径。该药血管外渗漏后出现严重组织坏死，溃疡形成等不良反应，给患者带来极大的痛苦。临床多以经验性治疗为主，如冷敷、局部注射地塞米松等，疗效欠佳。几丁糖、多磺酸黏多糖软膏均有促进皮肤损伤愈合的功能，有报道几丁糖、多磺酸黏多糖软膏对药物外渗性皮肤损伤有一定疗效[2-3]。本实验运用大鼠模型，探讨局部外涂几丁糖(Chitosan)、多磺酸黏多糖软膏(Hirudoid)对多西紫杉醇外渗性损伤的防治效果，为临床治疗提供实验依据。

1 材料和方法

设计：随机分组设计、动物对照观察。
时间及地点：实验于2006-04/2007-06在南方医科大学南方医院动物实验室完成。
材料：SPF级SD大鼠25只，雌雄不限，体质量 (252±26)g，由南方医科大学实验动物中心提供（许可证号：2002-009 2005A047），饲养于SPF环境中。将25只大鼠按随机数字表法分为5组：几丁糖组、多磺酸黏多糖组、几丁糖+多磺酸黏多糖组、生理盐水组、模型对照组，每组5只。取大鼠双侧侧腹部制作多西紫杉醇血管外渗的动物模型，每侧侧腹部为1个观察部位，每组共有10个观察部位。

实验方法：将25只SD大鼠用电动理发刀剪去双侧侧腹部皮毛，暴露皮肤直径4 cm以上，观察24 h，剪毛部位皮肤完好，未见红肿、充血等炎症反应。称大鼠体质量，用10%水合氯醛(3 mL/kg) 腹腔麻醉后，以双侧侧腹部作为注射点，常规消毒后，皮下注射0.2 mL含多西紫杉醇0.6 mg的药液(经预试验选择最佳给药剂量)，皮丘直径约0.5 cm。随后立即局部外涂解毒剂（几丁糖、多磺酸黏多糖软膏、几丁糖＋多磺酸黏多糖软膏、生理盐水），外涂方法：以多西紫杉醇注射部位为中点，涂抹半径为2 cm的皮肤面积，3次/d，共4 d；模型对照组不作任何防治干预。
主要观察指标：测量各组处理后1，5，9，13，17，21，25，29 d的外渗性损伤面积、计算愈合时间。损伤愈合后，观察即结束。损伤面积的计算:损伤处两条最长的垂直长度的乘积。每天同一时间测量损伤面积3次，取平均数为此部位损伤面积。外渗性损伤的判断标准：毛发缺失、皮肤破裂、黏膜缺损或溃疡形成达2 mm2以上。损伤愈合的判断标准：无红肿、充血等炎症反应，溃疡愈合，毛发重新长出。
设计、实施、评估者：设计为第一作者，实施为全部作者，评估为第二作者，评估者经过正规培训。
统计学处理：由第一作者采用SPSS 10.0进行数据处理，数据以x(_)±s表示。各组间外渗性损伤面积和损伤愈合时间比较采用方差分析(One-Way ANOVA)检验，两两组间比较采用LSD-t 检验，方差不齐时用Tambane’s T2检验。

2 结果

2.1 实验动物数量分析 纳入大鼠25只，均进入结果分析，无脱落。
2.2 皮肤损伤表现

各组大鼠在多西紫杉醇注射后不同时间局部出现界限不清的红斑、水肿，红斑颜色渐加深，与周围组织界限清，均在第5~7天出现皮肤糜烂，溃疡形成，未见明显水疱，损伤3~5周逐渐修复。
各组损伤程度不同，外涂几丁糖或多磺酸黏多糖组形成的溃疡面积较小，愈合时间缩短。模型对照组的损伤最重，平均愈合时间最长，未见长期不愈的溃疡，见图1。

2.3 损伤面积、愈合时间分析 各组处理后1，5，9，13，17，21，25，29 d的损伤面积均有减小；其中几丁糖组、多磺酸黏多糖组、几丁糖+多磺酸黏多糖组的损伤面积均低于生理盐水组、模型对照组，差异均有显著性意义（P < 0.05），见表1。

各组创面愈合时间均缩短；其中几丁糖组、多磺酸黏多糖组、几丁糖+多磺酸黏多糖组的创面愈合时间显著低于生理盐水组、模型对照组，差异有显著性意义[分别为(27.7±2.7)，(28.0±2.2)，(26.6±3.3)，(31.0±1.2)，(31.7±3.9)d，P < 0.05]。

3 讨论

多西紫杉醇为半合成的紫杉类药物，是细胞周期特异性药物，特异作用于M期细胞，通过抑制细胞有丝分裂，达到治疗作用，但在应用中其渗漏血管外可引起组织损伤或坏死。
本实验发现多西紫杉醇外渗后组织损伤修复缓慢。相对蒽环类、长春碱类药物，多西紫杉醇外渗所致组织损伤程度较轻，这与国外报道的多西紫杉醇外渗症状相符合[4]。临床治疗没有公认的指引，有些个案报道应用99%二甲基亚砜外涂有效[4-5]。本实验应用大鼠模型探讨了多西紫杉醇外渗性损伤的防治，几丁糖、多磺酸黏多糖软膏局部外涂均对此有不同程度的防治效果。
几丁糖是由虾、蟹壳等提纯的高分子化合物几丁质，经脱N-乙酰基再深加工后制成的一种聚氨基葡萄糖，是一种具有选择性促进上皮细胞、内皮细胞生长而抑制成纤维细胞生长等生物学特征的医用高分子多糖物质，还具有广谱的抑菌作用，对革兰氏阳性菌尤为明显，从而促进组织生理性修复，抑制瘢痕形成，减少组织粘连；对人体无毒性、无刺激性、无免疫抗原性、无热源性。临床上应用于创伤、关节炎、预防术后粘连等治疗。
几丁糖促进创面愈合的机制[6-7]为其可影响与创面愈合有关的多种细胞及细胞因子，如炎症细胞、内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞以及这些细胞分泌的细胞因子，还具有抑制微生物生长而减少创面感染性炎症的功能。临床上应用于烧伤创面、压疮、外伤创面、溃疡、脓肿等方面均取得良好的效果。应用于药物外渗性损伤方面，张敏等[2]发现几丁糖对多柔比星外渗性大鼠皮肤损伤有促进修复作用,且几丁糖的防治效果优于二甲亚砜；本实验也显示几丁糖外涂可促进多西紫杉醇外渗性损伤的愈合，其作用效果与多磺酸黏多糖软膏无显著性差异。
多磺酸黏多糖分子式是由若干磺酸化的D-葡萄糖醛酸与N-乙酰-D-半乳糖胺组成的二糖单元连结而成，对动物和人类皮肤有很强的渗透性，具有抗炎、抗血栓形成、促进正常结缔组织的再生；可应用于各种静脉炎、血肿、挫伤及静脉输液和注射引起的渗出损伤。王晓萍[8]应用磺酸黏多糖霜剂和羧甲基纤维素贴治疗Ⅲ、Ⅳ期压疮取得疗效。申东兰等[3]应用喜辽妥、依济复及前列地尔等治愈1例长春瑞滨外渗，疗程40 d。本实验应用多磺酸黏多糖软膏外涂防治多西紫杉醇外渗性损伤具有一定的疗效。但两药联合应用未能显著提高疗效，原因可能与两种给药途径相同有关；但从本实验数据分析，联合用药组的损伤面积比单独用药小、愈合时间短，随着样本数增大，可能显示出较强的效果，值得进一步研究。
因此，作者认为几丁糖、喜辽妥软膏局部外涂对多西紫杉醇外渗性损伤均有一定的疗效，两药联合应用未能提高疗效。但由于动物实验的局限性、样本数少，其疗效有待于临床进一步观察。

4 参考文献

1 Jordan K, Grothe W, Schmoll HJ..Extravasation of chemotherapeutic agents: prevention and therapy.Dtsch Med Wochenschr 2005；130(1-2):33-37
2 Zhang M，Li WP，Fu JF，et al.Zhonghua Huli Zazhi 2006；41 (3): 280- 284
张敏,李武平,付菊芳,等.几丁糖与二甲亚砜对大鼠多柔比星外渗性损伤防护的实验研究[J].中华护理杂志,2006,41(3):280-284
3 Shen DL，Nong QH，Chen XQ.Zhongguo Feiai Zazhi 2003；6(2):144-145
申东兰,农巧红,陈晓秋.长春碱类药物外渗性皮肤坏死的治疗探讨和文献复习[J].中国肺癌杂志,2003, 6(2):144-145
4 Berghammer P, P?hnl R, Baur M,et al.Docetaxel extravasation.Support Care Cancer 2001；9(2):131-134
5 Schrijvers DL.Extravasation:a dreaded complication of chemotherapy. Ann Oncol 2003；14(Suppl 3):iii26-iii30
6 Zarzycki R, Modrzejewska Z.Use of chitosan in medicine and biomedical engineering.Polim Med 2003；33(1-2):47-58
7 Zhang JD，Xing X，Zheng JS.Zhonghua Yixue Meixue Meirong Zazhi 2003；9(6):373-374
张敬德,邢新,郑健生.几丁糖对皮肤创伤愈合的影响[J].中华医学美学美容杂志，2003，9(6):373-374
8 Wang XP.Zhongguo Linchuang Kangfu 2004；8(19):3859
王晓萍.磺酸黏多糖霜与羧甲基纤维素贴联合治疗脑卒中后压疮的效果分析[J].中国临床康复,2004,8(19):3859