课题背景：课题为国家自然科学基金资助项目（30500499），名称为“大网膜包盖促进血管再生，不同发展程度的组织工程气管原位重建的动物实验研究”。本实验拟采用S-100和α-肌动蛋白抗原免疫组织化学的方法对早期组织工程化软骨进行评价，观察体外和体内培养条件下种植到支架上的软骨细胞是否具有维持软骨细胞的功能。

偏倚或不足：实验中仅对体外和体内培养的组织工程化软骨进行免疫组织化学观察，没有在软骨细胞植入前进行标记，以排除植入后周围组织的影响。在今后的研究中将会考虑对软骨细胞进行示踪标记。

临床应用性：实验结果证实在组织工程软骨形成早期，细胞外基质合成较少，尤其是当混杂有成纤维细胞所形成的纤维结缔组织时，应用S-100抗原和α-肌动蛋白抗原免疫组织化学方法可以用来鉴定体外和体内培养的组织工程化软骨。

背景：通常采用阿辛蓝染色技术鉴定软骨组织，然而对于组织工程软骨形成早期，阿辛蓝染色不能很好的显示细胞外基质的分泌情况。
目的：拟观察采用免疫组织化学法S-100抗原结合α-肌动蛋白抗原染色鉴别人工合成组织工程化软骨结构的可行性。
设计、时间及地点：对比观察，于2006-12/2008-02在深圳市人民医院临床医学研究中心完成。
材料：2周龄SPF级SD大鼠，体质量50~60 g，用于体外培养剑突软骨细胞；DegraPol材料，长20 mm，内/外径分别为2.5/ 4 mm，管壁厚度为0.75 mm，由瑞士联邦理工大学聚合材料研究所提供。
方法：于第3代收集软骨细胞接种于DegraPol管状支架形成软骨细胞-支架复合物，体外培养3周后植入同系大鼠腹腔大网膜体内培养1周。分别于体外培养3周和体内培养1周后取软骨细胞-DegraPol复合物制备组织学检测标本行苏木精-伊红染色和S-100抗原、α-肌动蛋白抗体免疫组织化学染色。
主要观察指标：倒置显微镜观察软骨细胞-DegraPol复合物的变化；免疫组织化学染色鉴定软骨细胞。
结果：体外培养3周后，苏木精-伊红染色显示软骨细胞位于软骨陷窝内，软骨基质呈蓝色。种植软骨细胞于DegraPol管状泡沫材料支架内侧面，体外培养3周后，在管腔的内侧壁S-100抗原阳性表达，α-肌动蛋白抗原阴性。证实在细胞-支架复合物植入同系大鼠体内培养之前已经形成了新的组织工程化软骨层。置入动物体内培养1周后，所获得的新组织为混合性的细胞结构，S-100抗原阳性多集中在管腔的内侧壁，而α-肌动蛋白抗原阳性反应多集中在管腔的外侧壁。
结论：软骨组织S-100抗原阳性表达，结缔组织α-肌动蛋白抗原阳性表达，S-100和α-肌动蛋白抗原可作为组织工程化软骨的鉴定指标。
关键词：软骨细胞；体外培养；组织工程；S-100；α-肌动蛋白

纪 玲☆，女，1970年生， 汉族，湖北省武汉市人，2003~2004年瑞士苏黎世大学医院，博士后，副教授，主要从事肺移殖免疫的研究。
Jilingdd@yahoo.com

通讯作者: 杨 林，2000~2004年瑞士苏黎世大学医院胸外科，博士后，副主任医师。暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院胸外科，广东省深圳市
518020
yanglin70@yahoo. com

国家自然科学基金资助项目(30500499)*

中图分类号: R318
文献标识码:B
文章编号: 1673-8225
(2008)28-05554-04

收稿日期：2008-02-03 修回日期：2008-06-06 (08-50-2-842/WL C)