课题背景：转基因沉默是基因工程存在的一种普遍现象，核基质附着区构建载体能提高外源基因表达水平，增强外源基因表达的稳定性，但有关其促进效应报道并不一致。CHO细胞表达系统能使外源基因完成蛋白质正确折叠和翻译后加工，为基因工程中一个重要的表达系统。因此寻找能显著提高CHO表达系统外源基因表达水平的核基质附着区片段具有重要意义。

应用要点: 实验选择CHO细胞表达系统，能使外源基因完成蛋白质正确折叠和翻译后加工。另外以人类基因组克隆的β-干扰素核基质附着区已经在其他宿主细胞被证实有提高转基因表达水平的作用，以此作为DNA片段，使实验设计更加可行。创新之处在于首次在CHO哺乳表达系统证实β-干扰素核基质附着区片段能提高转基因表达水平。

重要的概念: 核基质亦称核骨架，指真核细胞核内除去核膜、核纤层、染色质、核仁以外存在的一个由纤维蛋白构成的网架体系。可能参与染色体DNA有序包装和构建；对于间期核内DNA有规律的空间构型起着维系和支架作用；可能是DNA复制的基本位点；与基因表达密切有关，可能是细胞核中RNA转录位点和核不均一RNA的加工场所。

背景：核基质附着区是染色质被限制酶消化后仍附着在核基质上的DNA序列，不仅可影响邻近内源基因的表达，还能克服转基因沉默，提高外源基因的转录与表达。
目的：探讨在CHO细胞中β-干扰素核基质附着区对氯霉素乙酰转移酶转基因表达的影响。
设计、时间及地点：开放性实验，于2006-10/2007-04在新乡医学院生物化学与分子生物学实验室及分子研究室完成。
材料：CHO细胞株由中国典型培养物保藏中心提供。含氯霉素乙酰转移酶报告基因及G418筛选标记的质粒pCATG载体由本实验室构建。
方法：将PCR扩增得到的人β-干扰素核基质附着区分别用SacI/KpnI及BamHI/SalI酶切，连接至用相应内切酶酶切的pCATG载体上，转化E.coliJM109，提取质粒行酶切电泳，将构建好的载体命名为pCAT-MAR，该载体含氯霉素乙酰转移酶报告基因表达盒及两侧的β-干扰素核基质附着区。分别用载体pCATG及pCAT-MAR转化CHO细胞，提取具有G418抗性的细胞株基因组DNA，PCR扩增氯霉素乙酰转移酶基因。
主要观察指标：ELISA法分析氯霉素乙酰转移酶报告基因的表达。PCR法检测pCAT-MAR载体是否稳定整合在宿主基因组上。
结果：①pCATG转化的CHO细胞共筛选出16个阳性细胞株，pCAT-MAR转化的CHO细胞筛选出17个阳性细胞株。 β-干扰素核基质附着区可使氯霉素乙酰转移酶报告基因表达水平提高2.8倍，pCATG转化CHO细胞的变异系数为2.065 0，pCAT-MAR转化CHO细胞的变异系数仅为0.813 1。②稳定转化的细胞株基因组DNA均扩增出437 bp目的片段，证明pCAT-MAR载体已经稳定整合到基因组上。
结论：β-干扰素核基质附着区能提高转基因在CHO细胞的表达水平，并且可降低不同转化细胞株之间转基因表达的差异性。
关键词：核基质结合区；转基因；基因沉默；报告基因

昝玉玺，男，1963年生，河南省卫辉市人，汉族，1887年河南医科大学毕业，讲师，主要从事微生物分子遗传学方面的研究。
zanyuxi@xxmu.du.cn

通讯作者：王天云，博士，副教授，新乡医学院生物化学与分子生物学教研室，河南省新乡市 453003 wty@xxmu.edu.cn

国家自然科学基金(30470030)*；河南省自然科学基金（0511042300）*；河南省科技攻关项目(0624410041)*

中图分类号: R394.2
文献标识码: A
文章编号: 1673-8225
(2008)29-05623-04

收稿日期: 2007-11-24
修回日期：2008-04-01
（07-50-11-6541/ZS Q)