课题背景：课题受江苏省社会发展项目基金资助，编号BS2005043，课题名称“MSC治疗系统性红斑狼疮的免免疫调节机制研究”。经过初步研究，发现骨髓间充质干细胞对BALB/c小鼠、狼疮鼠模型（NZB/NZW F1代）和系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞、B淋巴细胞和树突状细胞均有免疫调节作用，骨髓间充质干细胞与某些免疫抑制剂先后使用或同时使用，可能使二者起到协同的作用。

应用要点：骨髓间充质干细胞对小鼠淋巴细胞的抑制效应已有报告，但课题组认为单独使用骨髓间充质干细胞治疗自身免疫病（例如系统性红斑狼疮）取得成功的可能性要小于骨髓间充质干细胞与免疫抑制剂（例如来氟米特、环磷酰胺等）联合。所以，实验首先采用骨髓间充质干细胞与来氟米特联合，观察其对BALB/c小鼠的免疫抑制效应，结果发现二者可以协同抑制小鼠T、B淋巴细胞增殖。

偏倚或不足：虽然骨髓间充质干细胞与来氟米特联合使用，可能使免疫抑制效应增强，但二者的作用机制有所不同，用相同指标分析二者的协同作用有较大的局限性。如何设计更为合理的实验方案是一个难点，值得进一步探讨。

背景：来氟米特是一种新型的免疫抑制剂，其活性产物A771726在体外能抑制增生分裂细胞的二氢乳清酸脱氢酶和酩氨酸激酶的活性，抑制活化淋巴细胞的增殖。
目的：观察骨髓间充质干细胞在体外联合来氟米特对小鼠淋巴细胞增殖的抑制效应。
设计、时间及地点：随机对照，细胞学免疫调控实验，于2007-06/11在江苏大学附属医院中心实验室完成。
材料：清洁级5~6周龄BALB/c雌性小鼠42只，18只分离制备骨髓间充质干细胞，传至第3代用于实验；24只用于制备脾淋巴细胞。来氟米特活性代谢产物A771726由美国欣凯公司肖飞博士惠赠。非特异性有丝分裂原ConA、脂多糖为sigma公司产品。
方法：将制备的T、B淋巴细胞悬液分为骨髓间充质干细胞组、来氟米特组、骨髓间充质干细胞+来氟米特组，其中骨髓间充质干细胞浓度为2×108 L-1，骨髓间充质干细胞数∶淋巴细胞数＝1∶30，来氟米特终浓度为15 mg/L，此外各组加入5 mg/L非特异性有丝分裂原ConA或25 mg/L脂多糖。
主要观察指标：MTT法检测T、B淋巴细胞增殖抑制率。通过表面标志检测T、B淋巴细胞活化情况。流式细胞仪测定T淋巴细胞凋亡程度。RT-PCR法检测T淋巴细胞干扰素γ、白细胞介素10、白细胞介素4 mRNA表达水平。
结果：与阳性对照比较，骨髓间充质干细胞组、来氟米特组、骨髓间充质干细胞+来氟米特组T淋巴细胞体外增殖抑制率均明显提高（P < 0.05），且后者变化幅度大于前两组（P < 0.05）；各组B淋巴细胞增殖抑制情况与上述结果相似。与阳性对照比较，各组T淋巴细胞CD3+CD69+、CD3+CD28+的表达以及B淋巴细胞CD19+CD69+、CD19+CD86+的表达均基本相似；骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞+来氟米特组T淋巴细胞凋亡率明显下降（P < 0.05）。与阳性对照比较，骨髓间充质干细胞+来氟米特组可使T淋巴细胞干扰素γmRNA提高、白细胞介素10 mRNA降低（P < 0.05），白细胞介素4 mRNA表达无变化，且其前2项指标变化幅度明显大于骨髓间充质干细胞组、来氟米特组（P < 0.05）。
结论：骨髓间充质干细胞与来氟米特体外联合，能抑制T淋巴细胞凋亡，可协同抑制T、B淋巴细胞增殖、白细胞介素10 mRNA表达，协同促进干扰素γmRNA的表达，对T、B淋巴细胞活化、白细胞介素4 mRNA表达无影响。
关键词：骨髓间充质干细胞；来氟米特；淋巴细胞；免疫调节

裘影影★，女，1976年生，江苏省镇江市人，汉族，江苏大学医学院在读硕士，主治医师，主要从事自身免疫性疾病诊治及间充质干细胞对系统性红斑狼疮免疫调节的研究。
lily_qiu9999@ 163.com

通讯作者：李晶，教授，硕士生导师，江苏大学附属医院风湿科，江苏省镇江市
212001
zjlijing@ public.zj.js.cn

江苏省科技厅社会发展项目
（BS2005043）*

中图分类号:R394.2
文献标识码:A
文章编号:1673-8225
(2008)29-05658-05

收稿日期：2007-11-30修回日期：2008-06-17 (07-50-11-6664/ZS Q)